Replikationsspänning och oxidativ skada bidrar till avvikande konstitutiv aktivering av DNA-skador som signaliseras i mänskliga gliomas | onkogen

Replikationsspänning och oxidativ skada bidrar till avvikande konstitutiv aktivering av DNA-skador som signaliseras i mänskliga gliomas | onkogen

Anonim

ämnen

  • Cell signalering
  • CNS-cancer
  • DNA-skador svar

Abstrakt

Maligna gliomas, de dödligaste av hjärnneoplasmer, uppvisar rasande genetisk instabilitet och resistens mot genotoxiska terapier, vilket medför potentiellt avvikande DNA-skadorespons (DDR) vid gliompatogenes och behandlingsfel. Här rapporterar vi om grov, avvikande konstitutiv aktivering av DNA-skador som signalerar i mänskliga gliomer med låg och hög kvalitet, och analyserar källorna till sådan endogen genotoxisk stress. Baserat på analyser av humana glioblastoma multiforme (GBM) cellinjer, normala astrocyter och kliniska prover från grad II astrocytomas ( n = 41) och grad IV GBM ( n = 60), drar vi slutsatsen att DDR-maskinerna är konstitutivt aktiverade i gliomas, som dokumenterad av fosforylerad histon H2AX (yH2AX), aktivering av ATM-Chk2-p53-vägen, 53BP1-foci och andra markörer. Oxidativ DNA-skada (8-oxoguanin) var hög i vissa GBM-cellinjer och många GBM-tumörer, medan den var låg i normal hjärn- och grad II-astrocytom, trots graden av DDR-aktivering var högre i grad II-tumörer. Markörer som indikerar pågående DNA-replikationsstress (Chk1-aktivering, Rad17-fosforylering, replikationsprotein A-foci och enkelsträngat DNA) var närvarande i GBM-celler under hög- eller låg-syreodlingsförhållanden och i kliniska prover av både låg- och högkvalitativ tumörer. Den observerade globala kontrollpunktsignaleringen, i motsats till endast fokala områden med överflödigt p53 (indikativt för p53-mutation) i grad II-astrocytom, överensstämmer med att DDR-aktivering är en tidig händelse i gliomagenes, initialt begränsande cellproliferation (lågt Ki-67-index) och selektera för mutationer av p53 och sannolikt andra gener som möjliggör flykt (högre Ki-67-index) från kontrollpunkten och underlättar tumörprogression. Sammantaget stöder dessa resultat den potentiella rollen för DDR-maskinerna som en barriär mot gliomagenes och indikerar att replikationsstress, snarare än oxidativ stress, drivar DNA-skadasignaleringen i tidiga stadier av astrocytomutveckling.

Introduktion

Maligna gliomas, särskilt den mest aggressiva typen, glioblastoma multiforme (GBM), är bland de mest förödande tumörerna, med generellt dåligt svar på terapi och dyster prognos (Furnari et al., 2007). Trots nyligen insikt om molekylvägar som är involverade i GBM-patogenesen, uppnådd genom omfattande genetisk analys under pilotprojektet för "The Cancer Genome Atlas" (The Cancer Genome Atlas Research Network, 2008) och andra studier (Furnari et al., 2007; Zheng et al., 2008), krävs en bättre förståelse av gliomas molekylära bas och biologi för att validera de nya, och utforma nya, riktade terapier. Rampant genomisk instabilitet och resistens mot genotoxiska behandlingsmetoder inklusive joniserande strålning och kemoterapi hör till kännetecknen för GBM (Furnari et al., 2007), vilket implicerar den cellulära DNA-skadesvaret (DDR) -maskineriet (Jackson och Bartek, 2009; Luo et al.)., 2009) som en viktig faktor i både patogenes och behandlingsrespons.

Nyligen har konstitutiv aktivering av DDR-vägar, med påföljande cellulär senescens eller celldöd, identifierats som en biologisk barriär mot aktiverade onkogener och tumörprogression i tidiga mänskliga skador (Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005b, 2006 ; Di Micco et al., 2006; Malette och Ferbeyre 2007; Halazonetis et al., 2008). Medan onkogen framkallade replikationsstress implicerade vid sådan DDR-aktivering, och konceptet validerades för huvudtyper av humana epiteltumörer (Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005b, 2007; Bartek et al., 2007), DDR aktiveringen var mycket låg eller frånvarande i humana testikulära kämcells tumörer (Bartkova et al., 2005a, 2007), och huruvida DDR-barriären fungerar i patogenesen av hjärnneoplasmer återstår att studera. Med tanke på den genetiska instabiliteten och nyckelrollen för strålterapi och genotoxisk kemoterapi vid hantering av maligna gliomer (Furnari et al., 2007) studerade vi här aktiveringen av DDR-maskiner i humana gliomcellinjer och kliniska prover från gliomas av olika kvaliteter av malignitet och undersökte källorna till den identifierade avvikande konstitutiva DNA-skadesignalen.

Resultat och diskussion

Immunohistokemisk analys av en serie med 60 glioblastoma multiforme-prover visade att DDR ofta aktiverades konstitutivt i dessa aggressiva tumörer, vilket indikeras av den starkt positiva γH2AX-färgningen (den mest använda markören, som dokumenterats i: Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005a, 2005b; Bonner et al., 2008), avvikande aktivering av ATM-Chk2-kinasvägen och andra DDR-markörer inklusive fokusbildning av 53BP1 (DiTullio et al., 2002) -proteinet (figur 1a och c) . Detta var i kontrast till avsaknaden av DDR-aktivering i de normala hjärnproven och endast sällsynta positiva celler i hjärnvävnader intill tumörområdena på samma sektion (figur la och d). Med tanke på att GBM-prover som undersöktes i vår studie togs bort kirurgiskt före början av strålterapi eller kemoterapi, indikerade dessa resultat att DDR-maskinerna aktiverades på grund av några avvikande, stressande endogena processer som hotar den genetiska integriteten och uppstår under GBM: s naturliga historia .

Immunoperoxidasfärgning av normal hjärna (N.Brain), astrocytomkvalitet II (Astro.II) och glioblastoma multiforme (GBM) för de indikerade markörerna för aktiverat DNA-skadorespons (DDR): γH2AX ( a ); foci-bildning med 53BP1 och yH2AX ( b ); Thr68-fosforylerad Chk2 (p-Chk2), Ser1981-fosforylerad ATM (p-ATM), ATM / ATR fosfosubstrat (p-'Pan '), Ser317-fosforylerad Chk1 ( c ); ( d ) grafisk sammanfattning av konstitutiv yH2AX i hjärnvävnad (N.Brain) och tumörer (Astro.II, GBM), jämfört med normalt bröst (N.Breast) och bröstkarcinom in situ (BCis), bedömt med semikvantitativt immunoperoxidasanalys baserat på andelen positiva celler (Bartkova et al., 2005b). De fyra kategorierna av markörpositivitet, indikerade till höger (0–1; 2–10; 11–50; 51–100), återspeglar andelen positiva celler inom en lesion (Bartkova et al., 2005b). Prover av formalin-fixerad, paraffin-inbäddad normal hjärna ( n = 15) och gliomas resekterade före början av strålbehandling eller kemoterapi: glioblastoma multiforme ( n = 60) och diffus astrocytom grad II ( n = 41), erhölls från vävnaden bankerna vid institutionerna för neuropatologi och patologi vid Köpenhamns universitet respektive Olomouc. Inom GBM-serien observerades inga uppenbara skillnader i färgningsmönster mellan primära och sekundära GBM: er, och därför betraktades serien gemensamt som 'GBM'. Immunoperoxidasfärgning (med en panel av antikroppar (kompletterande tabell 1) och poäng av de resulterande mönstren av en erfaren patolog utfördes såsom beskrivits (Bartkova et al., 2005b).

Bild i full storlek

Parallell undersökning av 41 grad II astrocytomas, en klass med mindre aggressiva lesioner som har en inre tendens att utvecklas till sekundär GBM (grad IV), avslöjade ännu mer uttalad DDR-aktivering än sett i GBM-serien, bedömd utifrån den globala γH2AX-markören (figurer La, b och d). Signalkaskaden för ATM-Chk2, känd för att primärt svara på DNA-dubbelsträngsbrott, aktiverades i astrocytom av grad II såväl som i GBM (figur 1c, kompletterande figur S1). I stort sett påminde om mönstren som observerades i olika epiteltumörer (Bartek et al. 2007) var andelen γH2AX-positiva celler högre än den hos celler med fosforylerade, aktiverade former av ATM eller Chk2 inom de individuella tumörproverna (jämför figur 1d med Kompletterande figur S1). Dessa resultat överensstämmer med uppfattningen att även andra typer av DNA-lesioner, såsom onormala replikationsmellanprodukter som inte omvandlas till dubbelsträngsbrott, kan ligga till grund för den observerade yH2AX-positiviteten och återspegla aktiviteten hos ataxia telangiectasia och rad-3-relaterat kinas ( ATR) som aktiveras av stress associerad med DNA-replikering (Bonner et al., 2008; Cimprich och Cortez 2008). Omfattningen av DDR-signaleringaktivering, som härleddes från yH2AX-markören, korrelerade inte strikt med graden av proliferation, vilket indikeras av den signifikant högre Ki67-positiva, cykelfraktionen av celler i GBM-serien, jämfört med en mer måttlig proliferationsgrad bland astrocytom av klass II (kompletterande figur S1c).

Intressant nog var den totala graden av DDR-aktivering (γH2AX) som observerades bland gliomas högre än den bland en serie karcinom - ( in situ ) i bröstet, en tidig stadium av karcinomskada som undersöktes här (figur 1d) som ett representativt exempel av de epitelitumörer som hittills identifierats som uppvisande avvikande konstitutiv aktivering av DNA-skador signalering (Bartkova et al., 2005b; Bartek et al., 2007). Av dessa resultat drar vi slutsatsen att DDR-maskinerna aktiveras konstitutivt och i hög grad under mänsklig gliompatogenes, analoga med epitelcancer, men i motsats till testikell kimcell (Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005a, 2005b, 2007; Nuciforo et al., 2007). Jämfört med andra typer av neoplasmer verkar gliomas vara tumörtypen med mycket robust, om inte den högsta, graden av sådan spontan DDR-aktivering.

I överensstämmelse med de kliniska proverna, immunblotting (figur 2a) och immunofluorescens (figur 2b) -analyser visade variabel grad av förbättrad yH2AX, aktivering av ATM-Chk2-p53-axeln och Chk1-fosforylering under ostörda odlingsbetingelser i GBM-cellinjer, i motsats till DDR-aktivering på låg nivå i normala humana astrocyter (figur 2a och b). Speciellt fosforylerades också det mutanta p53-proteinet som uteslutande uttrycks i vissa GBM-cellinjer på ser15, stället riktat av DDR-kinaser (ATM och ATR) (figur 2c). Huruvida en sådan ihållande fosforylering kan hjälpa till att stabilisera den mutanta p53 eller till och med bidra till vissa egenskaper för att få funktionen av mutant p53 återstår att studera. Trots den konstitutiva aktiveringen förbättrades DNA-skadesignaleringen ytterligare som svar på joniserande strålning (figur 2c och d), vilket indikerar att DDR-maskinerna fortfarande kan svara på exogena genotoxiska förolämpningar.

DNA-skadesvar (DDR) aktiveras konstitutivt i humana gliomcellinjer såsom dokumenterats för de indikerade markörerna genom immunblotting ( a, c ) och konfokala immunfluorescensmikroskopibilder ( b, d ). ( a ) Hela cellextrakt från U87MG, U373MG och A172 (europeisk samling av cellkulturer) SS859, Gli-6 och normala humana astrocyter (NHA) (Lonza) separerades med 8 eller 15% natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores och analyserades genom immunoblotting, med användning av antikropparna listade i tilläggstabell 1. NHA-, U373MG- och A172-celler odlades också parallellt i atmosfären av 3% syre (vidare markerat som NHA *, U373MG * och A172 *) för att efterlikna fysiologisk hypoxi (Li et al., 2005). a-tubulin tjänade som en belastningskontroll (TUB). ( b ) Immunofluorescensfärgningsmönster av spontant aktiverad ATM (p-ATM) och yH2AX, med användning av antikroppar listade i tilläggstabell 1 detekterades med sekundär antikropp kopplad till Alexa Fluor 488 (Molecular Probes, Invitrogen, Paisley, UK) och torkade täckglas monterade i ett 4 ', 6-diamidino-2-fenylindolinnehållande medium (Vector Laboratories Inc., Burlington, Kanada), såsom beskrivits (Bekker-Jensen et al., 2005). Konfokala bilder förvärvades med lika inställningar och behandlades med Zen 2008-programvaran (Carl Zeiss MicroImaging, Inc., Jena, Tyskland). ( c ) U373MG, U251MG-celler och ( d ) A172, T98G-celler behandlades med joniserande strålning av 5 Gy (doshastighet 2, 18 Gy / min av en röntgengenerator, Pantak, Berkshire, UK; HF160; 150 kV; 15 mA ) eller lämnade obehandlade och analyserade 1 timme ( c ) eller 30 minuter ( d ) efter bestrålning, såsom beskrivits (Knizetova et al., 2008). Ytterligare ökning av p-p53 Ser15 och p-Chk2 Thr68 efter joniserande strålning (5 Gy) över den redan förbättrade basaktiveringen observerades i båda GBM-cellinjerna.

Bild i full storlek

För att bedöma bidraget av oxidativ stress till den observerade DDR-aktiveringen jämförde vi två GBM-cellinjer som visade konstitutiv DDR-signalering (p53-mutant U373MG och p53-vildtyp A172), under standard (21%) kontra lågt (3%) syre de senare efterliknar den fysiologiska syrespänningen i hjärnan (Li et al., 2005; Bristow och Hill 2008). Vid 3% syrebetingelser reducerades den konstitutiva DDR-signaleringen (yH2AX, fosforylering av Chk2, Chk1 och Rad17), men eliminerades inte (figurerna 2a och 3b). Flödescytometri-mätning av 8-oxoguaninlesioner visade en cell-beroende variation med den lägsta nivån i normala astrocyter, och bekräftade att graden av oxidativ skada i GBM-celler under dramatiskt minskade, även om den inte helt eliminerades ( Figur 3c). Resultat som överensstämde med 8-oxoguaninmätningarna erhölls när graden av oxidativ spänning alternativt bedömdes genom flödescytometri-uppskattning av tiol-reaktiva klormetylgruppderivat av reducerat fluorescein för att mäta nivån av reaktiva syrearter (figur 3d, höger panel).

Konstitutiv aktivering av DNA-skadesvar (DDR) är en följd av varaktig replikations-stress-signalering och närvaron av oxidativa lesioner i astrocyter och gliomcellinjer. NHA- och U373MG * -celler odlades på täckglas och behandlades med hydroxyurea (2 timmar, 3 mM, Sigma-Aldrich Denamrk A / S, Broendby, Danmark) eller lämnades obehandlade. För bromodeoxyuridin (BrdU) och replikationsprotein A-färgning utfördes pre-extraktion för att underlätta visualisering av det kromatinbundna proteinet (Raderschall et al., 1999; Bekker-Jensen et al., 2005). Efter färgning (se kompletterande tabell 1 för antikroppar) torkades täckglaset, monterades i ett DAPI-innehållande medium (Vector Laboratories) och undersöktes med användning av LSM 510 META / Imager.Z1 (Plan-Apochromat × 63 / 1.40 olja DIC M27 mål, Zeiss). Konfokala bilder förvärvades med lika inställningar och behandlades med Zen 2008-programvara (Zeiss). För utvärdering av signalintegrerad densitet (SID), förvärvades bilder genom Zeiss Axioplan II fluorescensmikroskop (PLAN-Neofluar × 40 / 1.3 olje-nedsänkningsmål och fotograferades av en digital kamera (Cool Snap). Expositionstiden, binning, inställningen av mikroskopet och UV-ljuskällan hölls konstant för alla prover. Ytterligare bildbearbetning och analys utfördes såsom beskrivits (Mistrik et al., 2009). ( a ) Replikationsstress (enkelsträngat DNA detekterat med BrdU-införlivande visualiserat under icke-denaturerande förhållanden: toppanel; och genom bildning av RPA-foci: nedre panel) ihållande i U373MG * -celler odlade i lågt syre, jämfört med obehandlad eller hydroxyurea (HU) -behandlad normala astrocyter (NHA), relativt DDR-signalering (γH2AX foci). ( b ) Kvantifiering av yH2AX SID i NHA- och GBM-cellinjer. ( c ) Gliomaceller färgades med OxyDNA-analyssats (Calbiochem, CA, USA) enligt tillverkarens instruktioner för att detektera 8-oxoguanin (8-OxoG) -rester med användning av FA CSCalibur Flow Cytometer (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Nivåerna av 8-oxoguanin i utvalda cellinjer uttrycktes som vikningsökning över kontrollproven från tre oberoende experiment. ( d ) Kvantifiering av enkelsträngat DNA genom att mäta SID av BrdU-foci (inkorporerat BrdU detekterat under icke-denaturerande förhållanden, vänsterpanel) och nivå av reaktiva syrearter (ROS, höger panel) mättes med flödescytometri (som procent av positiv celler över obestämd kontroll). Celler (NHA, U373MG och U373MG * togs bort med användning av trypsin och färgades med CM-H2DCFDA-sond enligt tillverkarens instruktioner (Molecular Probes, Invitrogen). B, c, d : graferna visar medelvärden från 2-3 experiment med indikerat standardfel Stjärnor indikerar signifikansvärden P <0, 0001.

Bild i full storlek

Med tanke på att den oxidativa skadan nästan eliminerades (figur 3c), medan DDR-signaleringen minskade mindre dramatiskt (figurerna 3a och b), hävdade vi att de återstående konstitutiva DNA-skadorna i GBM-celler under förhållanden med låga syre kan återspegla pågående replikationsspänning och efterföljande DNA-brytning (Halazonetis et al., 2008). Faktum är att resultaten från tre oberoende analyser utförda för att ta itu med denna fråga överensstämde med sådan tolkning: (i) förbättrad bildning av enkelsträngat DNA (figur 3a och d, vänster panel) detekterat av bromodeoxyuridin

inkorporering visualiserad under icke-denaturerande förhållanden (Raderschall et al., 1999); (ii) yH2AX-fokuserna är vanligast i S-fasceller (kompletterande figur S2) och (iii) konstitutiv närvaro av replikationsprotein A-foci (figur 3a) som indikerar replikationsgaffelkollaps, enkelsträngad DNA-bildning och pågående rekombinationsreparation ( Raderschall et al., 1999).

Sammantaget gav resultaten erhållna med de odlade cellerna (figurerna 2 och 3, kompletterande figur S2) och kliniska prover (figur 1) flera förutsägelser för de kliniska proverna, oavsett om den observerade DDR-aktiveringen in vivo också återspeglar konstitutiv oxidativ skada och replikationsstress. Immunohistokemi analys visade nästan ingen 8-oxoguanin i normala hjärnvävnader, låg nivå bland grad II-astrocytom, i motsats till vanligt höga oxidativa skador i GBM (figur 4a). Sammantaget med maximal DDR-signalering (yH2AX) i astrocytom av grad II, och det faktum att även några 8-oxoguanin-låga regioner av GBM visade hög yH2AX-signalering (figur 4a), indikerade dessa resultat att källor till DNA skada andra än oxidativ stress kan sannolikt bidra till DDR-aktiveringen i gliomas, och kan i själva verket representera den viktigaste källan för den observerade konstitutiva DNA-skadesignaleringen. Våra fynd att både γH2AX (figur 1) och Chk1-aktivering (figur 1c och data inte visade) förbättrades massivt i både klass II-gliomas och de flesta GBM, överensstämmer med pågående replikationsstress (Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005b; Halazonetis et al., 2008) under hela utvecklingen av gliom.

Immunoperoxidasfärgning av normal hjärna (N.Brain), astrocytomas grad II (Astro.II) och glioblastomas (GBM) för de indikerade markörerna: ( a ) γH2AX och 8-oxoguanin på parallella sektioner; ( b ) yH2AX och p53 på parallella sektioner; medan båda områdena i denna tumör uppvisar avvikande konstitutiv DNA-skada signalering (yH2AX), är endast en starkt p53-positiv, vilket tyder på p53-mutation. ( c ) Ki-67 och p53 på parallella sektioner; notera den högre proliferationsgraden (fler Ki-67-färgade celler) i regionen med starkt p53-positiva (p53-mutanta) celler. För detaljer om kliniska prover och färgning av immunoperoxidas, se legend till figur 1. Antikropparna och deras specifikationer är listade i tilläggstabell 1. ( d ) Graföversikt över Ki-67-index i klass II-astrocytomregioner med "vildtyp" kontra " mutant p53-mönster inom samma skada som innehåller båda mönster i distinkta områden av sektionen (kohort A, olika regioner från fem fall); och analog jämförelse av Ki-67-indexet mellan alla fall av astrocytomkvalitet II med uteslutande "p53-vildtyp" -mönster, kontra de fall som visade mönstret av "mutant p53" (kohort B, n = 35).

Bild i full storlek

Slutligen, om den aktiverade DDR-maskinen skulle tillhandahålla en barriär mot gliomprogression, bör sådan DNA-skadesignalering föregå förekomsten av exempelvis p53-mutanta kloner (Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al., 2005b; Halazonetis et al., 2008) som väljs ut för och initialt visar en fokalt begränsad tillväxt i astrocytom av lägre klass (Furnari et al., 2007). Genom att testa denna hypotese fann vi att parallella astrocytomavsnitt visade de dominerande mönstren för aktiverad DDR (yH2AX) men normal p53 (med endast spridda p53-höga kärnor). Det är viktigt att begränsade områden i vissa astrocytomprover visade mycket rikligt p53 (ett 'p53-mutant-klonalt' mönster) medan DDR aktiverades globalt i hela skadorna (figur 4b). Detta, tillsammans med det faktum att överflödig 'mutant' p53 alltid hittades endast i GBM med hög konstitutiv DDR-aktivering, stödde uppfattningen att DDR-aktivering föregår och sannolikt väljer förekomsten av mer maligna gliomkloner med p53-mutationer.

En annan förutsägelse av den aktiva DDR som tillhandahåller en barriär mot gliomprogression, och p53-mutationer som möjligen är en väg att fly från begränsningarna av aktiverad DDR, är att spridningsgraden för tumörceller i låggraderade astrocytomskador med ihållande DDR-signalering och fortfarande vildtyp p53 skulle vara lägre jämfört med regioner av p53-mutanta kloner som dyker upp i sådana skador. I själva verket avslöjade direkt utvärdering med Ki-67-färgning på grad II-astrocytomvävnadssektioner parallellt med de färgade för p53 ett mycket signifikant förbättrat Ki-67-index i områdena med den överflödiga (mutanta) p53 (figurerna 4c och d), i överensstämmelse med uppfattningen att p53-mutation tillhandahåller en proliferativ fördel gentemot konstitutiv DDR-signalering.

Medan mutationer av p53 klassiskt har betraktats som mer frekventa bland de sekundära GBM-lesionerna som utvecklas från lägre grad av gliomer (Furnari et al. 2007), tyder nyare data på att p53 också riktas mycket ofta bland den primära GBM (Zheng et al., 2008). Dessa resultat överensstämmer med våra nuvarande uppgifter om utbredd aktivering av DDR-maskiner i humana lägre grad av gliomas såväl som GBM, och med begreppet aktivering av DNA-skada-kontrollpunkter som ett selektionstryck för utväxt av p53-defekta tumörkloner (Halazonetis et al., 2008).

Sammantaget dokumenterar våra resultat att signalering av DNA-skadepunkten avvikande och konstitutivt aktiveras från lågklassiga gliomas upp till GBM, i en stor del av celler som osannolikt är begränsade till, men kan omfatta, gliomstamcellerna (Bao et al. ., 2006). Dessa fynd stödjer den möjliga biologiska rollen för DDR-maskinerna i att begränsa expansionen av malande kloner med tillväxt med instabila genomer (Bartek et al., 2007; Halazonetis et al., 2008). Vilka är de genetiska skadorna som leder till den förbättrade replikationsstressen och konstitutiva DDR-aktivering i gliomas återstår att fastställa, men avvikande aktiviteter hos tyrosinkinasreceptorklass onkogener och förlust av vissa tumörsuppressorer såsom retinoblastomprotein är bland de främsta kandidaterna för sådana händelser. Slutligen är våra data relevanta för de nuvarande ansträngningarna för att utforma individualiserade behandlingar genom strålning eller kemoterapi i kombination med checkpoint- eller DNA-reparationshämmare (Zhou och Bartek, 2004; Bao et al., 2006; Helleday et al., 2008; Martin et al., 2008; Dungey et al., 2009; Jackson och Bartek 2009; Mukherjee et al., 2009). Till exempel kan våra nuvarande fynd av höga nivåer av 8-oxoguanin i undergrupper av GBM-fall visa sig vara användbara vid val av patienter för behandling med hämmare av poly ADP-ribospolymeras, ett enzym som är involverat i basskärningsvägen som krävs för att reparera sådana oxidativa lesioner. (Helleday et al., 2008; Martin et al., 2008; Jackson och Bartek 2009; Mukherjee et al., 2009).

Kompletterande information

Word-dokument

  1. 1.

    Kompletterande information

    Kompletterande information åtföljer uppsatsen på Oncogene-webbplatsen (//www.nature.com/onc)