Reducerad proteinsyntes trohet hämmar flagellär biosyntes och rörlighet | vetenskapliga rapporter

Reducerad proteinsyntes trohet hämmar flagellär biosyntes och rörlighet | vetenskapliga rapporter

Anonim

ämnen

  • Bakteriell genetik
  • Bakteriell fysiologi

Abstrakt

Exakt översättning av den genetiska informationen från DNA till protein upprätthålls genom flera steg för kvalitetskontroll från bakterier till däggdjur. Genetiska och miljömässiga förändringar har visat sig kompromissa med translationell kvalitetskontroll och minska trovärdigheten under proteinsyntes. Den fysiologiska effekten av ökade translationella fel är inte helt förstås. Även om det allmänt betraktas som skadligt, har nyligen visat sig att translationella fel gynnar celler under vissa stressförhållanden. I detta arbete beskriver vi en ny regleringsväg där reducerad translationell trovärdighet nedreglerar uttrycket av flagellära gener och undertrycker bakteriell rörlighet. Elektronmikroskopiavbildning visar att den felutsatta Escherichia coli- stammen saknar mogen flagella. Ytterligare genetiska analyser avslöjar att translationella fel uppreglerar uttryck av en liten RNA DsrA genom att förbättra dess transkription och ta bort DsrA från den felbenägna stammen återställer rörligheten. DsrA reglerar uttrycket av H-NS och RpoS, som båda reglerar flagellära gener. Vi visar att en ökad nivå av DsrA i den felbenägna stammen undertrycker rörlighet genom H-NS-vägen. Vårt arbete tyder på att bakterier kan slå på och stänga av flagellarsystemet genom att förändra translationell trohet, vilket kan fungera som en tidigare okänd mekanism för att förbättra konditionen som svar på miljöledningar.

Introduktion

Den genetiska informationen överförs från DNA till RNA till protein med hög trohet. I genomsnitt är felinkorporering av aminosyror ungefär 10 −3 –10 −4 1, 2 . En sådan trohet upprätthålls vid varje steg under genuttryck via noggrant urval av kognatunderlag och korrekturläsning av felaktiga produkter 3, 4, 5 . Exempelvis kräver translation av mRNA till protein noggrann ligering av aminosyror till höger överförings-RNA: er (tRNA) med aminoacyl-tRNA-syntetaser 6, 7, tillförsel av lämpliga aminoacyl-tRNA till ribosomen genom töjningsfaktorer 8 och exakt matchning av kodon och antikodon på ribosomen 9 . Trots sådana omfattande mekanismer för kvalitetskontroll är det känt att ökade translationella fel (mistranslering) orsakas av genetiska mutationer 10, 11, 12, näringssvält 13, 14, aminoglykosidantibiotika 15, 16, oxidativ stress 17, 18, 19, etanolspänning 20 och temperaturskift 21, 22 . Allvarlig mistranslering orsakar felaktig foldning och aggregering av protein 23, 24, vilket leder till celldöd, mitokondriella defekter och neurodegeneration 25 . En ny studie tyder också på att upprätthållande av translationell trovärdighet är avgörande för bakteriellt strikt svar 26 . Å andra sidan tolereras vissa nivåer av mistranslering och till och med gynnsamma under definierade stressförhållanden 27, 28 . Till exempel har vi nyligen visat att ökade translationella fel i Escherichia coli förbättrar överlevnaden under oxidativa stressförhållanden genom aktivering av det allmänna stressresponset, som kontrolleras av sigma-faktor RpoS 29 .

Flagella är komplexa molekylära maskiner som är kritiska för cellrörlighet och kemotaxi hos bakterier 30, 31 . En flagellum består av över 20 olika strukturella proteiner sammansatta för att bilda motorn, kroken och flagellärtråden 32, 33 . Uttryck av flagellära gener är starkt reglerade och hierarkiska 34, 35 . Masteroperon flhDC regleras av flera miljökoder och styr i sin tur transkription av flagellära strukturella gener. Jämfört med transkriptionell reglering förstås translationell reglering av flagellär syntes. Nyligen visat arbete visar att Bacillus subtilis kräver modifiering av töjningsfaktorn P för att effektivt översätta vissa flagellära proteiner 36 . Hur flagellär syntes påverkas av translationell tro är helt okänt. I det aktuella arbetet visar vi att mistranslering hämmar flagellär syntes och rörlighet i E. coli . En sådan hämning är oberoende av RpoS, men kräver istället inaktivering av ett histonliknande nukleoidstrukturprotein H-NS, vilket leder till reducerat uttryck av flhDC . Vi visar vidare att en liten RNA DsrA spelar en kritisk roll i mistranslationsmedierad undertryckning av bakteriell rörlighet.

Resultat

Mistranslation undertrycker motilitet och flagellar montering

För att undersöka den fysiologiska effekten av mistranslering, har vi tidigare konstruerat en E. coli- fel benägen stam genom att införa en punktmutation (I199N) i den kromosomala rpsD- genen, som kodar en proteinkomponent i den ribosomala lilla underenheten 29 . Den resulterande rpsD * -stammen (tabell S1) visar 5-faldigt ökat genomläsning av UAG-stoppkodon jämfört med moderstammen MG1655, men visar inte en minskad proteinsynteshastighet 29 . Mutationer i rpsD- genen minskar noggrannheten under kodon-antikodon-parring för att orsaka global mistranslering av alla mRNA och kan minska trovärdigheten för initiering, förlängning och avslutning under proteinsyntes 10 . RNA-sekvensering av rpsD * -celler odlade vid 37 ° C 29 avslöjar att flagellar-sammansättningen är den mest signifikant nedreglerade vägen jämfört med vildtyp (WT) MG1655 (P = 1, 9 × 10 −25 ). Eftersom även WT MG1655 visar låg uttryck för flagellära gener och långsam rörlighet vid 37 ° C, testade vi rörligheten för WT- och rpsD * -stammar vid rumstemperatur (25 ° C). Våra resultat visade att rpsD * -stammen var defekt i rörlighet på mjuka agarplattor (Fig. 1). Motilitetsdefekten räddades genom att antingen återvända den kromosomala rpsD * -mutationen eller införa en andra mutation (K42N) i rpsL- genen för att minska translationella fel (Fig. 1). K42N-mutationen är belägen nära ribosomal A-stället och begränsar parningen mellan kodon och antikodon, och har visat sig öka avkodningens trohet 37 . Förutom mistranslering orsakad av rpsD * -mutationen, minskar kodonspecifik mistranslering orsakad av tillsats av kanavanin (en argininanalog erkänd av arginyl-tRNA-syntetas och mistranslaterar argininkodoner) också rörligheten (Fig. S1). Därefter använde vi negativfärgad elektronmikroskopi för att visualisera flagellerna från WT- och rpsD * -stammar . Medan WT-celler innehöll flera flageller per cell visade de flesta rpsD * inga mogna flageller alls (fig. 2). Dessa resultat antyder att rörlighetsdefekten orsakad av mistranslation beror på försämrad flagellar-montering.

Motiliteten för WT-, rpsD *, rpsD * -revertant och rpsD * / L * -stammar testades på mjukagarplattor. I panel B beräknades den relativa rörligheten som procentandelen av punktdiametern relativt WT-stammen. De kvantitativa resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

( A ) Representativa elektronmikroskopivyer av WT- och rpsD * -celler. ( B ) Kvantifiering och fördelning av antalet flageller per cell. Stammen rpsD * visade mycket färre flageller per cell jämfört med WT.

Bild i full storlek

Mistranslation minskar uttrycket för flagellartade gener

Därefter testade vi expressionsnivåerna för flagellära gener i WT- och rpsD * -stammarna vid 25 ° C med användning av kvantitativ reverstranskriptionspolymeraskedjereaktion (qRT-PCR). RpsD * -mutationen minskade signifikant mRNA-nivåerna för alla testade flagellära gener, inklusive flgB (kodande för ett flagellartalt basal-kroppsstångprotein), flgK (kodande ett krok-filamentkorsningsprotein), fliA (kodande Sigma 28 involverat i syntes av senare stadium flagellära gener), fliF (kodande för ett MS-ring strukturellt protein) och flhDC (kodande masterregulatorn för flagellära gener FlhD och FlhC) (fig 3 och 4). Bland dessa gener är transkription av flgB och fliA beroende av FlhDC-komplexet, och flgK och fliF kontrolleras av både FlhDC och FliA 34, 35 .

Alla testade flagellära gener uttrycktes på signifikant lägre nivåer i rpsD * jämfört med WT vid 25 ° C. De kvantitativa resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

( A ) qRT-PCR för flhD och flhC mRNA. ( B ) Western blot av FLAG-FlhD-protein. Kvantifiering av FlhD-proteinnivå normaliseras med belastningskontroll RpoB. ( C ) Tidsförlopp för FLAG-FlhD-nedbrytning. De kvantitativa resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

För att bestämma hur translationsfel påverkar proteinnivån för FlhD, satte vi in ​​en Flagg-tagg vid 3′-änden av den kromosomala flhD- genen på det ursprungliga lokuset. Western blot med användning av en anti-Flag-antikropp avslöjade att FlhD-proteinnivån minskade 60% i rpsD * -stammen jämfört med WT (fig. 4B). Vi visade vidare att en sådan minskning inte berodde på accelererad nedbrytning (Fig. 4C), vilket tyder på att mistranslation nedreglerar FlhD på transkriptionell nivå och / eller translationell nivå.

Liten RNA DsrA hämmar rörlighet i felbenägen stam

Vi har tidigare visat att translationella fel aktiverar det allmänna stressresponset, som styrs av RpoS 29 . Ökningen av RpoS-nivå under felutsatta förhållanden vid 37 ° C beror på en liten RNA DsrA 29 . Det har föreslagits att RpoS negativt reglerar uttrycket av FliA och cellrörlighet i E. coli 38 . Vi testade sålunda om mistranslation undertrycker rörlighet genom uppreglering av RpoS. Att ta bort rpoS i rpsD * -stammen kunde inte återställa rörligheten (Fig. 5), vilket tyder på att RpoS inte spelar en viktig roll i flagellär syntes under felbenägna förhållanden. Att radera dsrA räddade emellertid motilitetsdefekten hos rpsD * -stammen (fig. 5). Konsekvent, överuttryckande DsrA från en plasmid i WT-stammen undertryckte rörlighet (fig. 5). För att testa DsrAs roll i reglering av expression av flagellära gener konstruerade vi en lacZ- reporter under kontroll av flgB- promotor. I linje med qRT-PCR-resultaten (fig. 3) minskade aktiviteten hos flgB- promotor (kontrollerad av FlhDC) 60% i rpsD * -stammen jämfört med WT (fig. 6). Att ta bort DsrA förbättrade transkriptionen av flgB till nästan samma nivå som WT. Tillsats av kanavanin minskade också aktiviteten hos flgB- promotor (Fig. S1B).

Att ta bort DsrA återställd motilitet i rpsD * -stammen , medan överuttryck av DsrA undertrycker motiliteten i WT-stammen. De kvantitativa resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

Promotorn för E. coli flgB smältes med lacZ- genen på en plasmid med lågt kopietal och transformerades till olika E. coli- stammar. P-galaktosidasaktiviteten bestämdes och visades som Miller Units. RpsD * -mutationen minskade flgB- promotoraktiviteten och borttagande av DsrA fullständigt återställd transkription av flgB- promotor. Resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

DsrA induceras vid låga temperaturer (t.ex. vid 25 ° C) genom förbättrad transkription och förbättrad stabilisering 39 . Med användning av qRT-PCR fann vi att RNA-nivån för DsrA ökades tre gånger med rpsD * -mutationen vid 25 ° C (fig. 7A). För att ytterligare undersöka hur mistranslering förbättrar DsrA-nivån testade vi transkription av dsrA med hjälp av en gul fluorescerande proteinreporter under kontroll av dsrA- promotor. Transkription av dsrA- promotor ökade 2, 5 gånger i rpsD * -stammen jämfört med WT (fig. 7B). Därefter bestämde vi stabiliteten hos DsrA genom att hämma transkription med rifampicin (Rif) och följa RNA-nivån över tid. RpsD * -mutationen förstärkte inte stabiliteten hos DsrA (fig. 7C), vilket antydde att ökningen i DsrA-RNA inträffade på transkriptionell nivå. Sammantaget tyder våra data på att mistranslation höjer DsrA-RNA-nivån, vilket i sin tur nedreglerar uttrycket av flagellära gener och undertrycker rörlighet.

( A ) Jämn tillståndsnivå för DsrA RNA bestämd med qRT-PCR. ( B ) Promotoraktivitet för DsrA bestämd med användning av en YFP-reporter. ( C ) Nedbrytning av DsrA i E. coli- stammar. Resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

DsrA-medierad motilitetsdämpning beror på H-NS

Förutom RpoS är ett annat huvudmål som regleras av DsrA H-NS 40 . Vi visade att det att återställa dsrA i rpsD * -stammen återställde rörligheten (fig. 5 och 8A). I frånvaro av hns ökade borttagningen av dsrA inte längre rörligheten för rpsD * -celler (fig. 8A). Däremot förhindrade inte raderingen av rpoS fullständig räddningseffekten av dsrA- borttagning (fig. 8A). För att dissekera rollerna för RpoS- och H-NS-vägarna i reglering av rörlighet av DsrA utnyttjade vi dessutom tidigare rapporterade DsrA-mutanter som specifikt försämrar regleringen av rpoS ( dsrA * R ) eller hns ( dsrA * H ) 41 . I komplementeringsanalysen, överuttryck WT DsrA eller DsrA * R, som båda har förmåga att hämma H-NS-aktivitet, väsentligen reducerad rörlighet för WT- dsrA- stammen (Fig. 8B). Däremot visade överuttryckning av DsrA * H, som inte direkt påverkar H-NS-vägen, endast en mindre minskning i rörlighet (Fig. 8B).

( A ) Att ta bort H-NS avskaffar effekten av DsrA-borttagning som återställer rörlighet i rpsD * -celler. ( B ) Överuttryckande av H-NS-specifik DsrA ( dsrA * R ) undertryckte rörlighet i WT-celler. Resultaten är genomsnittet av minst tre upprepningar med felstänger som indikerar standardavvikelser.

Bild i full storlek

DsrA reglerar H-NS på översättningsnivå 42 . I linje med detta fann vi att mRNA-nivån för hns var oförändrad med rpsD * -mutationen (Fig. S2A). Emellertid ökade aktiviteten hos en H-NS-undertryckt promotor ( hdeA ) signifikant i rpsD * -stammen (fig. S2B), vilket antyder att den totala H-NS-aktiviteten sänks av rpsD * -mutationen . Dessutom reglerades mRNA-nivåerna för flhDC i rpsD * -stammen (fig. 4A), vilket är förenligt med tidigare rapporter om att H-NS stimulerar transkription av flhDC 43 . Våra resultat antyder därför att DsrA reglerar flagellarsyntes och rörlighet främst genom H-NS-vägen.

Diskussion

Bakterier använder flagella för rörelse i miljön. Flagella används också som bakteriella mekanosensorer för att initiera biofilmbildning 44 och är viktiga för virulens i många bakteriella patogener 32 . Å andra sidan konsumerar biosyntes och funktion av flagella betydande cellresurser 45, och flagella aktiverar också värdets immunsvar som hämmar och dödar invaderande bakterier 46, 47, 48 . Flexibel modulering av flagellär syntes är således viktig för bakteriell anpassning till ofta förändrade naturliga miljöer. I denna studie visar vi att att reducera translationell tro leder till minskad flagellär syntes och förlust av rörlighet i E. coli . Vi har tidigare visat att reducerad translationell trovärdighet aktiverar det allmänna stressresponset och främjar bakteriell överlevnad under stressförhållanden 29 . Undertryckande av flagellär syntes skulle möjliggöra att cellulära resurser bevaras för väsentliga aktiviteter för att upprätthålla cellviabilitet, t.ex. syntes av stressresponseffektorproteiner.

Vi visar att mistranslation undertrycker flagellär syntes och rörlighet genom förbättrad transkription av DsrA. DsrA är ett litet RNA som finns i flera Gram-negativa bakterier, inklusive Escherichia , Salmonella och Shigella . DsrA RNA-nivå ökas signifikant vid låga temperaturer på grund av både ökad transkription och minskad nedbrytning 39, och temperaturreglering av dsrA- transkription beror på komplex promotorarkitektur 49 . Våra resultat visar att transkription som drivs av dsrA- promotor förbättras i den felbenägna stammen (Fig. 7). Hittills är den enda kända transkriptionsregulatorn för DsrA LeuO, som förtrycker DsrA-transkription 50 . I våra tidigare RNA-sekvensresultat 29, ökar LeuO mRNA-nivån i rpsD * -stammen jämfört med WT. Exakt hur DsrA-transkription regleras av mistranslation återstår att klargöra i framtiden. Det är troligt att en annan okänd transkriptionell regulator av DsrA påverkas av global mistranslering av protein, t.ex. genom stabilisering av en transkriptionell aktivator på grund av titrering av tillgängliga proteaser med en ökad nivå av mistranslaterade proteiner. Det är också möjligt att missöverskridande får LeuO till felfoldning och förlorar sin aktivitet.

Små RNA har visats reglera rörlighet via olika mekanismer 51 . Våra data antyder att effekten av DsrA på bakteriell rörlighet kräver H-NS istället för RpoS. DsrA blockerar syntes av H-NS-protein genom basparning med det translationella startstället för dess mRNA 42 . Ökat uttryck av DsrA i den felbenägna stammen förväntas således sänka H-NS-aktiviteten. Vi har använt en H-NS-undertryckt promotor hdeA som en reporter för att testa H-NS-aktiviteten och visa att H-NS-aktiviteten undertrycks i rpsD * -stammen jämfört med WT (fig. S2). H-NS reglerar ett stort antal gener, inklusive aktivering av flhDC- transkription 40, 43 . En ny studie tyder också på att H-NS påverkar bakteriell rörlighet via FlhDC-oberoende vägar 52 . Vi visar att överuttryck av FlhC är tillräckligt för att återställa rörligheten hos den felbenägna stammen (Fig. S3), vilket antyder att mistranslation undertrycker rörlighet främst genom nedreglering av flhDC i en process som kräver DsrA och H-NS. Sammantaget har våra resultat avslöjat en tidigare okänd koppling mellan translationell trohet och flagellär syntes, vilket kan spela en viktig roll i bakteriell anpassning till ständigt förändrade miljöförhållanden.

Material och metoder

Stammar, plasmider, tillväxtbetingelser och reagens

Stammar och plasmider som användes i denna studie är listade i tabell S1, och oligos listas i tabell S2. E. coli odlades i Lennox buljong (LB) vid 37 ° C under omrörning om inte annat anges. Antibiotika användes i följande koncentrationer: ampicillin (amp), 100 μg / ml; kloramfenikol (Chl), 25 μg / ml. Antibiotika och andra kemikalier köptes från Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) och RNas-fri DNase I var från Thermo Scientific (Rockford, IL).

Genetikering av bakteriestammar

Alla stammar som användes i denna studie är derivat av E. coli K-12-stam MG1655 (WT), som erhölls från E. coli Genetic Stock Center vid Yale University. Alla genetiska deletionsmutanter inom ramen konstruerades såsom beskrivits med användning av kloramfenikol som resistensmarkör 53 . Alla mutanter verifierades genom PCR och antibiotikaresistensmarkören avlägsnades därefter från deletionsstammarna med användning av plasmid pCP20, som härdades vid 42 ° C efteråt. De markörfria deletionsmutanterna verifierades genom både förlust av resistens och PCR.

Fusionen av 3 × FLAG-taggen vid 3'- änden av flhD genomfördes enligt följande. En kassett innehållande toxinet som kodar genen ccdB under kontroll av araBAD-promotor och en kanamycinresistensgen (Ranquet et al ., Inlämnat, deponeringspatentnummer: FR11 / 60169, 08/11/2011, UJF / BGene) amplifierades från genomiskt DNA-mall av CR201-stammen (erhållen från N. De Lay) med användning av primrarna FlhD-KN1 och FlhD-CCDB1 och infördes i kromosom genom X-röd rekombinas-medierad genersättning. Kan- ccdB- kassetten smält med flhD i kromosomen ersattes sedan med gBlock-fragmentet av 3 × FLAG-taggen (FlhD-FLAG, syntetiserad från Integrated DNA Technology). De framgångsrika rekombinanterna (YF56 och YF57) erhölls genom selektion för tillväxt i närvaro av arabinos (1%) och verifierades med PCR.

Elektronmikroskopi

Övernattning av bakterier utspäddes 1: 100 till färsk LB och odlades till OD 600 ~ 0, 8 vid 25 ° C under omröring. Celler uppsamlades och tvättades i 0, 1 M NaCl och återsuspenderades i fosfatbuffrad saltlösning. För att undersöka celler genom elektronmikroskopi placerades 7 ul odling på kolbelagda nickelgaller (Electron Microscopy Sciences) under 1 minut, tvättades tre gånger med sterilt vatten och färgades sedan negativt med 0, 2% uranylacetat under 30 sekunder. Proverna visualiserades med användning av ett JEOL JEM-1400 elektronmikroskop. Celler valdes slumpmässigt för att räkna antalet flageller.

Simuleringsanalys

Övernattning av bakterier utspäddes 1: 100 till färsk LB och odlades till OD 600 ~ 0, 8 vid 25 ° C under omröring. Alla kulturer normaliserades till samma OD 600 innan de upptäcktes på nyligen gjorda tryptonbuljong (10 g / L trypton och 5 g / L NaCl) -plattor innehållande 0, 25% agar. För stammar med plasmider tillsattes lämpliga antibiotika i tryptonbuljongens rörelseplattor. Plattor inkuberades vid 25 ° C över natten innan de tog bilder och mätte diametrar av fläckar. De kvantitativa resultaten representerar procentandelen av diametern jämfört med WT-stammen på samma platta.

Kvantitativ omvänd transkription-PCR

Midloggfasceller odlade i LB-medium vid 25 ° C normaliserades till samma OD 600 och skördades. Totalt RNA extraherades med användning av het fenol och resterande kromosomalt DNA avlägsnades såsom tidigare beskrivits 54, förutom att glykogen användes för att fälla ut RNA-prover. För att testa RNA-nedbrytning tillsattes nyligen framställt rifampicin (250 μg / ml slutkoncentration) i normaliserade bakteriekulturer för att helt stoppa transkription vid tiden noll.

Omvänd transkription och kvantitativ PCR utfördes med iScript cDNA Synthesis Kit och SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix Kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) enligt tillverkarens instruktioner. 16S rRNA användes som en intern referens för normalisering. ΔΔCt-metoden användes för att erhålla vikändringen av målgener i de mutanta stammarna jämfört med de i WT-stammarna.

Bestämning av FlhD-proteinuttryck

För att bestämma uttryck av FlhD smältes en 3 × FLAG-tagg på C-terminalen på flhD precis före stoppkodonet i både WT- och rpsD * -stammar . Midloggfasceller odlade i LB-medium vid 25 ° C normaliserades till samma OD 600 och skördades. Samma volym bakteriekulturer användes för att framställa totalt protein med användning av triklorättiksyra / acetonproteinutfällningsprotokoll. För provberedning för att testa FlhD-nedbrytning, tillsattes nyligen framställd kloramfenikol (100 ug / ml slutlig koncentration) till normaliserade bakteriekulturer för att fullständigt stoppa translation vid tidpunkten noll, och samma volym kulturer samlades för proteinberedning vid specifik tidpunkt. Western blot utfördes enligt standardförfaranden 55 med användning av en primär anti-FLAG-antikropp.

Bakteriellt fluorescensprotein och lacZ-reporter

För att mäta fluorescensintensiteten hos reporterstammar späddes bakteriekultur över natten till 0, 01 OD 600 i LB. Celler odlades vidare i plattor med 96 brunnar som inkuberades vid 25 ° C i plattläsaren (BioTek) med skakning. Både OD 600 och fluorescens mättes med 15 minuters intervaller under totalt 20 timmar. Stammar som bär pZS * 11 användes som positiva kontroller för att eliminera skillnaderna i proteinsynteshastighet mellan olika stammar. För mätning av lacZ- reporter genomfördes ß-galaktosidasanalys enligt beskrivning 24 .

ytterligare information

Hur man citerar den här artikeln : Fan, Y. et al . Minskad proteinsyntes Fidelity hämmar flagellär biosyntes och rörlighet. Sci. Rep. 6, 30960; doi: 10.1038 / srep30960 (2016).

Kompletterande information

PDF-filer

  1. 1.

    Kompletterande information

kommentarer

Genom att skicka en kommentar samtycker du till att följa våra villkor och gemenskapsriktlinjer. Om du finner något missbruk eller som inte överensstämmer med våra villkor eller riktlinjer ska du markera det som olämpligt.