Vid pediatrisk lymfoblastisk leukemi av b-cellurs ursprung är en liten population av primitiva sprängceller icke-cykling, vilket antyder att de är leukemi-stamcellekandidater | pediatrisk forskning

Vid pediatrisk lymfoblastisk leukemi av b-cellurs ursprung är en liten population av primitiva sprängceller icke-cykling, vilket antyder att de är leukemi-stamcellekandidater | pediatrisk forskning

Anonim

ämnen

  • Akut lymfocytisk leukemi
  • Cellproliferation
  • Barncancer

Abstrakt

Kinetiska undersökningar vid pediatrisk akut lymfoblastisk leukemi (ALL) är baserade på alla sprängceller och återspeglar därför de proliferativa egenskaperna hos den dominerande immunofenotypen för leukemiska celler. Ingenting är känt om spridning av immunologiskt definierade sällsynta underpopulationer av leukemiska celler. I denna studie undersöktes mononukleära celler från benmärgen hos 15 barn med obehandlad CD19 + B-cellprekursor ALL för proliferativa funktioner enligt immunofenotypen. Efter uteslutning av starkt prolifererande återstående normala hematopoietiska celler var 3% av sprängcellerna CD19 - och visade en låg procentandel celler i S-fas bedömd med bromodeoxyuridin-märkningsindex (BrdU-LI): median BrdU-LI, 0, 19% [ interkvartilt intervall (IQR), 0, 15–0, 40%]. Däremot hittades en median BrdU-LI på 7, 2% (IQR, 5, 7–8, 8%) för det stora CD19 + -blastcellfacket. Färgning av utstryk av sorterade CD19-celler för CD10 eller CD34 avslöjade en liten fraktion av CD19 - CD10 - eller CD19 - CD34 - sprängningsceller. Dessa celler var nästan icke-spridande med en median BrdU-LI på <0, 1% (IQR, 0–0, 2%). Detta proliferativa beteende antyder en stam / stamförocellsfunktion och dessutom kan den låga proliferativa aktiviteten göra dem mer resistenta mot en antiproliferationsbaserad kemoterapi. Emellertid är xenotransplantationsexperiment nödvändiga för att demonstrera en möjlig stamcellsfunktion.

Huvudsaklig

Vid pediatrisk B-cellprekursor akut lymfoblastisk leukemi (BCP-ALL) uttrycker majoriteten av sprängceller B-cellantigen CD19. En mindre fraktion av blastceller saknar emellertid CD19-uttryck och motsvarar enligt den aktuella uppfattningen av B-celldifferentiering en mer omogen cellpopulation (1). Undersökningar av cellproliferation hos barn ALL baseras vanligtvis på hela leukemicellpopulationen i benmärgen, och resultaten återspeglar det proliferativa beteendet hos den dominerande immunologiskt definierade fenotypen av sprängceller. Mot bakgrund av den pågående debatten om immunofenotypen för leukemi-stamceller (LSC) i pediatriska BCP-ALL (2) var det av intresse att analysera de proliferativa egenskaperna hos ALLA celler i olika stadier av immunofenotypisk mognad. Vanligtvis kännetecknas stamceller av proliferativ lugn eller en mycket låg proliferationsgrad. Eftersom den faktiska behandlingen av ALL huvudsakligen är inriktad på spridande celler, skulle icke-cykliska leukemiska celler företrädesvis undgå sådan behandling och bidra till ALLA återfall. Därför skulle det vara av stort intresse att definiera en lugn / lågproliferande leukemisk cellpopulation mer detaljerat. Denna studie visar att vid obehandlad BCP-ALL, immunofenotypisk mognad av leukemiska celler parallellt med en ökning av proliferationsgraden och visar förekomsten av en liten population av icke-spridande leukemiska celler med en mycket omogen fenotyp.

METODER

Material.

Benmärgsprover från 15 barn (ålder, 2–16 år) med obehandlad BCP-ALL erhölls från diagnostisk benmärgsaspiration. Genom diagnostisk flödescytometri uttrycktes CD19-antigenet på 97 ± 3% av sprängceller. Studien godkändes av etiska kommittén vid University Barns Hospital Bern, och informerat samtycke erhölls från patienterna eller deras föräldrar.

Cell sortering.

Mononukleära benmärgsceller isolerades genom Ficoll-gradientcentrifugering. För att avgränsa T-lymfocyter och föregångare B-celler färgades cellerna i suspension med MAb mot CD19 konjugerad med fluorescein (FITC) och CD3 konjugerad med phycoerythrin (PE; båda från Becton Dickinson, Allschwil, Schweiz) och separerades sedan genom fluorescensaktiverad cellsortering (FACScan Becton-Dickinson) till CD3 +, CD19-, och CD19 + cellpopulationer; i ytterligare experiment användes fördelningen av CD19-fluorescensintensitet för att sortera CD19 + -celler i två subpopulationer av lika stor storlek, en med låg (CD19 + låg ) och den andra med hög (CD19 + hög ) fluorescensintensitet. Förutom prover av BCP-ALL analyserades NALM-6-celler, en kommersiellt tillgänglig pre-B-cellinje på samma sätt.

Immunologisk färgning.

De sorterade cellerna inkuberades in vitro med bromodeoxyuridin (BrdU) och, efter framställning av cytocentrifugtsprut, färgades med en anti-BrdU-antikropp för att möjliggöra detektion av celler i S-fasen av cellcykeln (BrdU-märkningsindex, LI; BrdU Etiketterings- och detekteringssats, Roche Diagnostics, Rotkreuz, Schweiz). Förutom BrdU färgades fläckar av sorterade celler också med MAb mot CD34, CD10, myeloperoxidas eller glykoforin A (allt från Becton Dickinson) och den alkaliska: anti-alkaliska fosfatasmetoden (APAAP) såsom beskrivits tidigare (3). Dessutom färgades cytocentrifugtsprut av CD19 + låga och CD19 + höga celler med en polyklonal antikropp från kanin mot retinoblastomproteinet fosforylerat vid serin 608 (pRbSer608; Cell Signaling Technology, BioConcept, Allschwil, Schweiz) följt av en alkalisk fosfataskonjugerad getantikropp mot kaninimmunoglobuliner (get-anti-kanin AP; Dako, Glostrup, Danmark).

DNA-färgning.

För att bedöma variationer i expressionen av CD19-antigenet under de olika faserna i cellcykeln färgades BCP-ALL-celler och NALM-6-celler i suspension samtidigt med en FITC-konjugerad monoklonal anti-CD19-antikropp och med den DNA-bindande fläcken Hoechst 33342 (bisBenzimideH 33342 triklorid; Sigma Chemical Co.-Aldrich Chemie, Buchs, Schweiz) och analyserades sedan av FACS.

Hybridisering in situ.

Eftersom 5 av de 15 analyserade BCP-ALL-proverna uttryckte ETV6-RUNX1 (TEL / AML1) -fusionen för att bekräfta det leukemiska ursprunget för de analyserade cellpopulationerna, utfördes FISH-utvärdering för omväxling av ETV6-RUNX1 på kärnor med sorterad CD19 + och CD19 - celler med LSI TEL / AML1 ES Dual Color Translocation Probe (Abbott Diagnostics, Baar, Schweiz) för TEL (ETV6) vid 12p13 och AML1 (RUNX1) vid 21q22.

Statistik.

Eftersom uppgifterna distribuerades icke -ormalt, beräknades median- och interkvartilintervall (IQR). För statistiska utvärderingar användes det icke-parametriska Wilcoxon-signerat-rank-testet.

RESULTAT

Patienter.

Kliniska och laboratoriedata från 15 patienter med obehandlad BCP-ALL visas i tabell 1.

Full storlek bord

Analys av sorterade celler.

En representativ grindning och sortering av benmärgsceller från ett barn med obehandlad BCP-ALL visas i figur 1. Detta mönster överensstämde med alla 15 analyserade benmärgsprover. Sorterade CD19 - CD3 + -celler (grind P1) motsvarade morfologiskt normala, små, icke-spridande T-lymfocyter. Majoriteten av CD19 - CD3 - celler (gate P2) hade sprängningscellsmorfologi; emellertid kan vissa erytroblaster och omogna myeloida celler detekteras inom denna underpopulation. CD19-antigenet uttrycktes på 93, 1% (IQR, 87, 5–96, 9%) mononukleära benmärgsceller motsvarande morfologiskt till leukemiska sprängningsceller (fig. 1 A ). Frekvensen och BrdU-LI för de olika sorterade cellpopulationerna visas i tabell 2. Eftersom celler som uttrycker CD19-antigenet hade en signifikant högre proliferativ aktivitet än CD19-celler ( p <0, 001; Fig. 2), var det av intresse för undersöka sambandet mellan intensiteten av CD19-antigenuttryck och den proliferativa aktiviteten inom CD19 + -cellpopulationen. Därför sorterades CD19 + -celler till CD19 + låg (grind P3a) och CD19 + höga subpopulationer (grind P3b; Fig. 1 B ), medianvärdet för celler i DNA-syntesfasen var signifikant högre bland celler med ett högt jämfört med de med ett lågt CD19-antigenuttryck ( p <0, 001; tabell 2). Skillnaden i det proliferativa beteendet bekräftades genom färgning av cellprover av sorterade CD19 + låg och CD19 + hög leukemiska sprängceller med en antikropp mot retinoblastomproteinet som fosforyleras vid serin 608 (pRbSer608), en markör associerad med proliferationsceller (4) . Medianvärdena för pRbSer608-positivitet var 49% (IQR, 40–64%) och 74% (IQR, 66–85%) för CD19 + låg respektive CD19 + högblastcellpopulationer, ( p = 0, 0022). För att demonstrera ett cellcykelberoende av CD19-antigenuttryck bedömdes BCP-ALL-prover såväl som NALM-6-celler genom FACS-analys för DNA-innehåll och CD19-fluorescens. Såsom visas i figur 3 för starkt prolifererande NALM-6-celler ökade intensiteten av CD19-fluorescens från G1-fasen till G2 / M-fasen. Därför antyder skillnaden i de prolifererande egenskaperna mellan CD19 + låg och CD19 + hög leukemiska celler att uppreglering av CD19-antigenuttrycket sker under övergång genom cellcykeln.

Grindning och sortering av mononukleära benmärgsceller i obehandlad BCP-ALL. ( A ) Celler färgade med fluorokrommärkta monoklonala anti-CD3 - PE och anti-CD19 - FITC antikroppar sorterades i CD3 + CD19 - celler (grind P1), CD3 - CD19 - celler (grind P2) och CD3 - CD19 + celler (grind P3). Insats: FISH-analys av sorterade CD19 + och CD19 - celler i ett representativt ETV6 / RUNX1-positivt fall med LSI TEL / AML1 ES Dual Color Translocation Probe; pilarna indikerar fusionssignaler. ( B ) CD19 + -celler delades vidare in i cellpopulationer med låg (grind P3a) och hög (grind P3b) antigenuttryck. Insättning: Fördelning av CD19-fluorescensintensitet.

Bild i full storlek

Full storlek bord

BrdU-LI av sorterade CD19 - och CD19 + leukemiska celler. I sorterade CD19-celler kan en enda svartfärgande BrdU-positiv cell ( pil ) ses ( vänster panel ); i CD19 + -celler kan 8 BrdU-positiva celler detekteras ( höger panel ).

Bild i full storlek

CD19-antigenuttryck under cellcykeln i NALM-6-celler. ( A ) Distribution av DNA-innehåll; ( B ) distribution av CD19-fluorescensintensitet, godtyckligt separerad i låg och hög fluorescens med en linje som dras genom fördelningen av kurvan; och ( C ) CD19 fluorescensintensitet enligt DNA-innehållet.

Bild i full storlek

Eftersom 5 av de 15 analyserade ALLA proverna presenterade t (12; 21) kromosomal translokation för att bekräfta den leukemiska naturen hos sorterade CD19 + och CD19 - celler, utfördes FISH-analys i två representativa ETV6 / RUNX1 positiva fall. Fusionssignalen kunde detekteras i cellkärnor på 90–100% av CD19 + -celler respektive 75–90% av CD19-celler. Med tanke på närvaron av 5–10% normala hematopoietiska celler i CD19 - cellutrymmet i dessa två ALLA prover, bekräftades den leukemiska naturen hos CD19 - celler med sprängningscellsmorfologi (Fig. 1 A , inlägg).

Återstående normala hematopoietiska celler.

Den totala BrdU-LI för CD19 - CD3 - cellutrymmet var 0, 7% (IQR, 0, 5-1, 3%). Detta berodde emellertid också på återstående normal hematopoietisk aktivitet i detta fack av benmärgsceller. För att avgränsa normala cykelhematopoietiska celler färgades cytocentrifugtsprut av sorterad CD19 - CD3 - benmärgsceller antingen med en MAb mot myeloperoxidas (MPO) eller en MAb mot glykoforin A (GPA), i kombination med en anti-BrdU-antikropp . Denna procedur gjorde det möjligt att bedöma de relativa frekvenserna och BrdU-LI för kvarvarande myeloida och erytroidceller. Efter att dessa normala celler uteslutits från ytterligare analys beräknades den relativa frekvensen och BrdU-LI-värdet för de återstående leukemiska sprängningscellerna. Inom CD19 - CD3 - benmärgscellepopulation var en median på 93, 2% (IQR, 88, 0–97, 4%) sprängceller med en BrdU-LI av 0, 19% (IQR, 0, 15–0, 40%), 2, 9% (IQR, 1, 6 –6, 8%) var återstående normala myeloida celler som färgade positivt för MPO med en BrdU-LI av 14, 7% (IQR, 9, 4–22, 5%) och 2, 2% (IQR, 0, 9–5, 6%) var eryroidceller som färgade positivt för GPA med en median BrdU-LI-värde på 6, 8% (IQR, 1, 8–11, 5%). Av alla BrdU-positiva S-fasceller inom CD19 - CD3 - cellutrymmet var 64% MPO + och 24% var GPA + ; därför motsvarade endast 12% av S-fasceller leukemiska sprängceller. Detta faktum betonar vikten av att känna igen resterande normala hematopoietiska celler i kinetiska undersökningar av CD19 - leukemisk cellfack.

Leukemic CD19 - subpopulationer.

För att ytterligare analysera CD19 - blastcellfacket undersöktes uttrycket av CD34 eller CD10, tidiga markörer i B-celldifferentiering. Individuella cytocentrifugtsprut av sorterade CD19 - CD3-celler färgades för BrdU i kombination med en av följande markörer: CD34, CD10, MPO eller GPA. Den relativa storleken och BrdU-LI för CD19 - CD34 + eller CD19 - CD34 - och CD19 - CD10 + eller CD19 - CD10 - leukemiska sprängningscellpopulationer, liksom den för normala MPO + och GPA + -celler, kunde definieras. Bland CD19 - CD3-celler var 65% (IQR, 25–80%) CD34 + och 62% (IQR, 24–84%) CD10 + . Efter uteslutning av återstående normala hematopoietiska celler visas den relativa storleken på de olika sprängcellsavdelningarna, som definieras av immunofenotypen, och deras BrdU-LI i tabell 3. Procentandelen av S-fasceller inom CD19 - CD34 + och CD19 - CD10 + subpopulationer var jämförelsevis låg i intervallet 0, 2–0, 3%. Blastcellpopulationerna med en immunofenotyp av antingen CD19 - CD34 - eller CD19 - CD10 - var nästan alla icke-spridande. På grund av den extremt låga proliferativa aktiviteten var det svårt att bedöma det exakta BrdU-LI-värdet för dessa två leukemiska cellpopulationer med de metoder som användes, och ett provtagningsfel måste beaktas. Icke desto mindre visar resultaten tydligt att i BCP-ALL minskar BrdU-LI för leukemiska sprängceller med ökande omogenhet av sprängningscellpopulationen. BrdU-LI hos CD19 + -blastceller var signifikant högre än för CD19-blastceller ( p <0, 001), inom CD19-blastcellpopulationen CD34 + eller CD10 + -cellerna hade en signifikant högre proliferationsgrad än CD34- eller CD10 - sprängceller ( p = 0, 0320).

Full storlek bord

Kinetiska beräkningar.

För att bedöma påverkan av de olika BrdU-LI-värdena för CD19 + och CD19 - leukemiska sprängningsceller på expansionen av den totala maligna cellpopulationen, beräknade vi fördubblingstiden ( t d ) för dessa två leukemiska subpopulationer, dvs den tid som krävs för att fördubbla deras cellnummer. För denna beräkning använde vi en median DNA-syntestid ( t s ) på 18, 8 timmar (IQR, 17, 5–20, 2 timmar) och en fraktionerad dödsfrekvens (FDR), dvs andelen leukemiska celler som dör av apoptos per dag, på 2, 4% (IQR, 1, 3–3, 7%), som beskrivits i tidigare arbete med BCP-ALL (5, 6). Eftersom dessa undersökningar har gjorts på hela leukemicellpopulationen kan de rapporterade värdena vara korrekta för huvuddelen av CD19 + sprängceller, men inte för de sällsynta CD19 - leukemiska cellerna. Eftersom normala terminala deoxynukleotidyltransferas (TdT) -positiva lymfoida prekursorceller i benmärgen också visade en t på 18 timmar (5), använde vi detta värde för både CD19 + och CD19 - leukemiska cellpopulationer. För CD19 - blastceller, som har låg proliferativ aktivitet, sattes FDR till 0%. Detta resulterade i fördubblingstider i intervallet 1, 5 wk för CD19 + sprängceller och 10 mo för CD19-blastceller ( p <0, 001; tabell 4). Omberäkning med en variabel DNA-syntestid mellan 12 och 18 timmar och en FDR mellan 0 och 0, 1% för CD19-blastceller resulterade i en fördubblingstid mellan 5 och 12 mo. Alla dessa beräkningar är baserade på en antagen exekveringsfas av apoptos i leukemiska celler på 6 timmar (6). Med detta värde skulle en FDR på 0, 24% i CD19 - leukemiska celler ( ts inställd på 18 timmar) resultera i en population utan tillväxt ( t till oändlighet). Antagande av värden mellan 3 och 8 timmar under varaktigheten av exekveringsfasen för apoptos, procentandelen apoptotiska celler som resulterar i en FDR på 0, 24% skulle variera mellan 0, 03 och 0, 08%. Dessa beräknade värden antyder att antalet apoptotiska celler i CD19 - leukemiska cellfacket bör vara mycket litet; annars skulle denna cellpopulation försvinna.

Full storlek bord

DISKUSSION

Den samtidiga immunocytokemiska färgningen av sorterade cellpopulationer för ytmarkörer och BrdU-införlivning tillåter en kombinerad bedömning av immunofenotyp och cellproliferation och dessutom en utvärdering av cellmorfologi. Till skillnad från en undersökning av cellsuspensioner med flödescytometri var det emellertid inte möjligt att färga en enda smet med mer än två immunologiska markörer. För att övervinna denna metodologiska begränsning utfördes färgning med olika markörer på separata cellutstryk. Med användning av denna teknik var det möjligt att bedöma den relativa storleken och de proliferativa egenskaperna för sprängcellsfack med olika immunofenotyper. För bedömningen av BrdU-LI i CD19 - subpopulationer antogs det att återstående normala MPO + myeloida celler och GPA + erytroblaster skulle sakna CD34- eller CD10-antigenuttryck. Följaktligen korrigerades endast facken av CD19 - CD34 - och CD19 - CD10 - celler för kontaminering av återstående normal hematopoietisk aktivitet. Detta kan vara giltigt för CD10-antigenuttryck, men vissa omogna myeloida celler kan uttrycka CD34-antigenet och därför skulle bidra till den proliferativa aktiviteten inom CD19 - CD34 + -cellfacket.

Leukemisk cellproliferation hittades huvudsakligen i CD19 + -facket innehållande ∼ 97–99% av alla leukemiska celler. Intressant nog var CD19-antigenuttryck inte enhetligt, men cellcykelberoende med en ökning av fluorescensintensiteten från G1 / tidig S-fas till G2 / M-fasen i cellcykeln. För kinetiska undersökningar av det lilla facket med CD19-sprängningsceller var det avgörande att eliminera normala återstående hematopoietiska celler. Vi kunde visa att det mesta av den proliferativa aktiviteten inom CD19 - cellavdelningen berodde på kvarvarande myeloida celler och erytroblaster. De återstående CD19 - leukemiska cellerna visade en mycket låg spridningsgrad. Genom att dela upp CD19-blastcellpopulationen enligt uttrycket av CD34- eller CD10-antigenet, kunde det visas att BrdU-LI hos negativa celler var signifikant lägre än BrdU-LI för celler som uttrycker antingen CD34- eller CD10-antigen. Det måste emellertid nämnas att endast uttrycket av CD10-antigenet är relaterat till mognadstadiet, medan CD34-uttryckning också kan vara relaterat till cellcykling (7). I pediatrisk BCP-ALL återspeglas därför den hierarkiska strukturen hos den leukemiska cellklonen som definieras genom immunofenotypisk mognad av de leukemiska cellernas proliferativa beteende. Den proliferativa aktiviteten hos sprängceller varierar från mer eller mindre lugn i de mest omogna immunofenotyperna till det välkända proliferationsmönstret i de mogna CD19 + leukemiska cellerna. Eftersom ingen patient återfaller hittills kunde vi inte jämföra proliferativa egenskaper vid diagnos och vid återfall. Resultat som erhållits från en patient med BCP-ALL som endast undersökts vid hematologiskt återfall skulle antyda exakt samma proliferativa beteende hos de olika blastcellpopulationerna som i obehandlad BCP-ALL.

LSC: er i pediatriska BCP-ALL definieras vanligtvis antingen genom xenotransplantationsexperiment eller genom långsiktiga proliferationsanalyser in vitro . Nyare publikationer om immunofenotypen av LSCs som detekterats med dessa metoder är mycket kontroversiella. Vissa författare tycker att LSC bor bland omogna CD19 - ALLA celler, medan andra tycker att de befinner sig inom sprängcellspopulationer i olika stadier av immunofenotypisk mognad eller bland CD19 + CD34 + CD38 låg leukemiska sprängcellspopulationer (8–12). I detta sammanhang måste definitionen av LSC genom xenotransplantationsexperiment diskuteras kritiskt. Hittills finns det inget bevis på att stamcellaktivitet för ALLA celler som detekteras genom transplantation i olika immunbristliga musstammar är lika med leukemiinitierande kapacitet i en klinisk miljö. Vidare, genom flödescytometrisk analys av pediatrisk B-avstamning ALL, kunde en kandidat-LSC-population med fenotypen CD19 + CD34 + CD38 inte detekteras i 40% diagnostiskt och 40% av minimala återstående sjukdomspositiva prover (13). Därför, åtminstone i en väsentlig andel av B-linjen ALL, skulle immunofenotypen av LSC inte motsvara CD19 + CD34 + CD38- låga celler. En annan nyligen publicerad rapport rapporterade om en samband mellan frekvensen av omogna leukemiska celler, definierad av fenotypen CD34 + CD38 - (närvaron eller frånvaron av CD19-antigenet rapporterades inte), och nivån av minimal restsjukdom efter induktionsterapi i ALL och, därför med prognos (14). Här visar vi för första gången att i BCP-ALL kan man hitta ett litet fack av primitiv CD19 - leukemiska celler med en mycket låg proliferativ aktivitet. Därför visar dessa celler, som visat sig vara leukemiska genom FISH-analys i två ETV6 / RUNX1-positiva fall, ett proliferativt beteende som en stam / stamfamiljpopulation. Ytterligare experiment, inklusive xenotransplantationsstudier, måste emellertid bevisa en stam- / stamfårcellfunktion hos detta sprängcellsavdelning. Nyligen genomförda undersökningar som tittade på genomomfattande DNA-kopiaantal avvikelser i obehandlad BCP-ALL upptäckte en slående genetisk variation och subklonal mångfald (15, 16). Dessutom visades det att återfallande ALLA kan ha sitt ursprung i genetiskt definierade subkloner som antingen var dominerande eller existerade endast som en mindre subpopulation vid tidpunkten för den första diagnosen och att mer än 50% av återfallen visade en klonal utveckling från förfäderkloner (17) . Detta antyder en genetisk heterogenitet hos LSC i ALLA. Att titta på stadiet med immunofenotypisk mognad när denna genetiska mångfald genereras skulle hjälpa till att definiera immunofenotypen för leukemistamceller.

För att få lite inblick i tillväxtegenskaperna hos leukemiska cellpopulationer i olika stadier av immunofenotypisk mognad utfördes kinetiska beräkningar baserade på värden för DNA-syntestid och apoptotisk hastighet i BCP-ALL som beskrivits tidigare (5, 6). Våra data antyder att den kontinuerliga expansionen av den leukemiska cellpopulationen i obehandlad BCP-ALL uteslutande är baserad på den proliferativa aktiviteten hos CD19 + sprängceller. Den låga proliferativa aktiviteten hos omogna CD19-sprängningsceller bidrar endast till att bibehålla storleken på denna cellpopulation men inte till att utvidga den totala leukemiska cellpopulationen, ett drag som tyder på en stamcell / föregångare cellfunktion.

Sammanfattningsvis visas att i pediatriska CD19 + BCP-ALL kan ett litet antal omogna CD19 - leukemiska celler detekteras som är väsentligen icke-spridande, en funktion delad med hematopoietiska stam- / stamföroceller. Huruvida denna proliferativa stillhet verkligen återspeglar en stam / stamförocellsfunktion måste undersökas i ytterligare xenotransplantationsexperiment. Skillnaden i det proliferativa beteendet hos leukemiska celler vid olika nivåer av immunofenotypisk mognad kan också ha klinisk relevans. Eftersom en antiproliferationsbaserad kemoterapi huvudsakligen skulle påverka de mer mogna, aktivt spridande CD19 + -blastcellerna, kan primitiva, icke-spridande sprängceller ha en större chans att överleva och därefter bidra till ALLA återfall.

Ordlista

ALLT

akut lymfoblastisk leukemi

BCP-ALL

Föregångare för B-celler ALLA

BrdU

bromdeoxiuridin

FACS

fluorescensaktiverad cellsortering

FDR

fraktionerad dödsfrekvens (antal celler förlorade med apoptos per 24 timmar)

GPA

glykoforin A

IQR

kvartilavståndet

LI

märkningsindex

LSC

leukemi stamcell

MPO

myeloperoxidas

t s

DNA-syntestid