Hämning av mitokondrialt komplex-1 förhindrar nedreglering av nkcc2 och enacα vid obstruktiv njursjukdom | vetenskapliga rapporter

Hämning av mitokondrialt komplex-1 förhindrar nedreglering av nkcc2 och enacα vid obstruktiv njursjukdom | vetenskapliga rapporter

Anonim

ämnen

  • Syra, bas, vätska, elektrolytstörningar
  • Njursjukdomar

Abstrakt

Ureteral hindring med efterföljande hydronephrosis är en vanlig klinisk komplikation. Nedreglering av renala natriumtransportörer i hindrade njurar kan bidra till försämrad urinkoncentrationsförmåga och saltavfall efter frisläppandet av en urinhinder. Den aktuella studien genomfördes för att undersöka rollen av mitokondriell komplex-1-hämning i modulering av natriumtransportörer vid obstruktiv njursjukdom. Efter unilateral ureteral obstruktion (UUO) under 7 dagar observerades en global reduktion av natriumtransportörer, inklusive NHE3, a-Na-K-ATPase, NCC, NKCC2, p-NKCC2, ENaCa och ENaCy, som bestämdes via qRT- PCR och / eller Western blotting. Intressant nog reverserade hämning av mitokondrialt komplex-1 av rotenon markant nedregleringen av NKCC2, p-NKCC2 och ENaCa. Däremot påverkades andra natriumtransportörer inte av rotenon. För att studera de potentiella mekanismerna som är involverade i att förmedla effekterna av rotenon på natriumtransportörer undersökte vi ett antal kända natriummodulatorer, inklusive PGE2, ET1, Ang II, natriuretiska peptider (ANP, BNP och CNP) och kväveoxidsyntaser (iNOS, nNOS och eNOS). Det är viktigt att endast dessa BNP och iNOS reducerades signifikant bland dessa modulatorer genom rotenonbehandling. Sammantaget visade dessa fynd en väsentlig roll av mitokondriell dysfunktion vid medling av nedregleringen av NKCC2 och ENaCa vid obstruktiv njursjukdom, möjligen via iNOS-härledd kväveoxid och BNP.

Introduktion

Obstruktiv njursjukdom är en vanlig klinisk komplikation 1, 2, 3, 4 . Hos barn orsakas njurobstruktion vanligtvis av medfödda avvikelser i njurarna och urinvägarna 5, 6, 7 . Hos vuxna är de vanligaste orsakerna stenar, prostataförstoring och tumörer i urinvägarna 1, 2, 3 . I allmänhet är njursviktfunktion reversibel när hindret släpps inom en kort tidsperiod. Men långvarig njurobstruktion leder till njurfibros och permanent förlust av njurfunktion. Ett etablerat fenomen inom obstruktiv nefropati är nedreglering av natriumtransportörer i den obstruktiva njuren, vilket kan bidra till urin koncentrationsfel efter frisläppandet av njurobstruktionen. Både cyklooxygenas (COX) -2-härledd prostaglandin (PG) E2 och angiotensin (Ang) II har rapporterats tillskrivas minskningen av natriumtransportörer i den hindrade njuren 8, 9 . Mer intensiv studie kommer emellertid att krävas för att avslöja patogenesen för detta fenomen i detalj.

Mitokondriell abnormalitet har rapporterats vid obstruktiv nefropati 10, 11, 12, 13 . Mitokondriell dysfunktion resulterar i ATP-utarmning, överproduktion av reaktivt syre (ROS) och frisättning av proapoptotiska faktorer såsom cytokrom C och mitokondriell DNA. Dessa onormala svar kan spela viktiga roller i patogenesen av många sjukdomar. I överensstämmelse med detta koncept rapporterade vår grupp att hämning av mitokondrialt komplex-I försvagade obstruktiv njurskada, möjligen via hämning av oxidativ stress, inflammation och fibros 13 . En global nedreglering av natriumtransportörer i den hindrade njuren tros vara en av de viktigaste faktorerna som leder till nedsatt njurfunktionskapacitet 8, 9 . Men vår förståelse av mekanismerna som leder till sådana avvikelser är fortfarande ofullständig.

I den aktuella studien, med användning av mitokondrialt komplex-1-hämmare rotenon, undersökte vi 1) huruvida hämning av mitokondrialt komplex-I kunde påverka nedregleringen av natriumtransportörer i den hindrade njuren; och 2) huruvida några kända diuretiska faktorer påverkades av rotenonbehandling och potentiellt bidragit till effekten av rotenon på reglerande natriumtransportörer.

Resultat

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på mRNA-expressionen av natriumtransportörer i hindrade njurar

För att studera rollen av rotenonbehandling vid reglering av natriumtransportörer vid obstruktiv njursjukdom undersökte vi mRNA-uttrycket hos natriumtransportörer inklusive NHE3, α-Na-K-ATPase, NCC, NKCC2 och tre ENaC-subenheter (α, β, och y) via qRT-PCR. Data visade att NHE3, a-Na-K-ATPase och NCC markant nedreglerades i hindrade njurar, vilket inte påverkades av rotenonadministration (Fig. 1A – C). Däremot var en markant reduktion av NKCC2-mRNA-uttryck delvis men omvänt signifikant genom rotenonbehandling (fig. 1D). För de tre ENaC-subenheterna inhiberades nedregleringen av ENaCa i hindrade njurar fullständigt av rotenon (fig. 1E). Emellertid förändrades inte mRNA-nivåerna för ENaCp och ENaCy genom ureteral hindring eller rotenonbehandling (fig. 1F, G).

( A ) qRT-PCR-analys av NHE3. ( B ) qRT-PCR-analys av NCC. ( C ) qRT-PCR-analys av a-Na-K-ATPas. ( D ) qRT-PCR-analys av NKCC2. ( E ) qRT-PCR-analys av ENaCα. ( F ) qRT-PCR-analys av ENaCp. ( G ) qRT-PCR-analys av ENaCγ. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på proteinuttrycket av NKCC2 och fosforylering av NKCC2 i hindrade njurar

Resultaten av immunohistokemi visade att den robusta nedregleringen av NKCC2-proteinuttryck i den hindrade njuren var helt förbjuden genom rotenonbehandling (fig. 2A). På liknande sätt avslöjade Western blotting en slående reduktion av NKCC2-nivåer och fullständig återställning efter rotenonadministrering (fig. 2B, C). För att undersöka statusen för NKCC2-fosforylering undersökte vi vidare nivåerna av fosforylerad NKCC2 genom Western blotting och observerade ett liknande regleringsmönster som totalt NKCC2 (Fig. 2B, D). Förhållandet mellan p-NKCC2 och total NKCC2 påverkades emellertid inte av njurobstruktion eller rotenonbehandling (Fig. 2E), vilket indikerar att förändringen av p-NKCC2 berodde på förändring av total NKCC2. Dessa resultat demonstrerade en potent roll av mitokondriell komplex-I-hämning för att hämma nedreglering av NKCC2 i de tjocka stigande lemmarna i hindrade njurar.

( A ) Immunohistochemistry of NKCC2. ( B ) Western blot-analys av NKCC2 och p-NKCC2. ( C ) Densitometrisk analys av NKCC2. ( D ) Densitometrisk analys av p-NKCC2 normaliserat med p-aktin. ( E ) Densitometrisk analys av p-NKCC2 normaliserat med total NKCC2. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 4–5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på proteinuttrycket av ENaC-subenheter i hindrade njurar

Vi undersökte vidare proteinnivåerna för natriumkanalerna ENaCα, ENaCβ och ENaCγ. I likhet med NKCC2 reverserades nedreglering av ENaCα genom rotenonbehandling, bestämd via immunohistokemi och Western blotting (Fig. 3A – C). ENaCp-proteinet påverkades emellertid inte av njurhinder eller rotenonbehandling (Fig. 4A, B). För ENaCy reducerades den icke-klyvda formen (85 kDa) inte i hindrade njurar (fig. 5A, C). Intressant nog orsakade rotenonbehandling större induktion av icke-klyvad ENaCy (fig. 4A, C). Däremot försvann den klyvda formen (70 kDa) av ENaCy helt i de hindrade njurarna, vilket inte påverkades av rotenon (fig. 4A, D).

( A ) Immunohistochemistry of ENaCα. ( B ) Western blot-analys av ENaCa. ( C ) Densitometrisk analys av ENaCα. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 4–5 i varje grupp.

Bild i full storlek

( A ) Western blot-analys av ENaCp och ENaCγ. ( B ) Densitometrisk analys av ENaCβ. ( C ) Densitometrisk analys av ENaCγ (85 kDa). ( D ) Densitometrisk analys av ENaCγ (70 kDa). De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 4–5 i varje grupp.

Bild i full storlek

( A ) Western blot-analys av NHE3 och a-Na-K-ATPas. ( B ) Densitometrisk analys av NHE3. ( C ) Densitometrisk analys av a-Na-K-ATPas. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 4–5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på proteinuttrycket av NHE3 och a-Na-K-ATPas i hindrade njurar

Genom Western blotting undersökte vi ytterligare regleringen av NHE3- och a-Na-K-ATPase-proteinerna. Såsom visas i fig. 5 minskade både NHE3 och a-Na-K-ATPas markant i hindrade njurar, och rotenonadministration hade ingen signifikant effekt på dessa förändringar.

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på njurinnehållet i PGE2 och Ang II och mRNA-uttrycket av endotelin (ET) 1 och angiotensinogen (AGT) i hindrade njurar

En genomgång av litteraturen avslöjade att både PGE2 och Ang II har rapporterats spela roller i att förmedla minskningen av natriumtransportörer vid obstruktiv njursjukdom. Därför undersöker vi innehållet i PGE2 och Ang II i hindrade njurar med eller utan rotenonbehandling. Överraskande ändrades inte induktionen av PGE2 och Ang II genom rotenonadministrering (fig. 6A, B). I överensstämmelse med det oförändrade Ang II-innehållet påverkades inte uppregleringen av AGT av rotenon, såsom bestämdes med qRT-PCR (Fig. 6C). Baserat på den kända rollen ET1 i regleringen av natriumtransportörer undersökte vi också mRNA-nivån för ET1 och observerade robust stimulering av ET1 i hindrade njurar, som inte påverkades av rotenonadministration (Fig. 6D). Dessa resultat antydde att PGE2, Ang II och ET1 kanske inte kan hänföras till effekterna av rotenon på natriumtransportörreglering i hindrad njure.

( A ) Njurinnehåll i PGE2 bestämd via EIA. ( B ) Njurinnehåll i Ang II bestämd via ELISA. ( C ) mRNA-expression av AGT bestämd via qRT-PCR. ( D ) mRNA-expression av ETl bestämd via qRT-PCR. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på förmaks-natriuretisk peptid (ANP), hjärn-natriuretisk peptid (BNP) och C-typ natriuretisk peptid (CNP) -uttryck i hindrade njurar

Natriuretiska peptider i njuren uppvisar en etablerad roll för att reglera natriumtransportörer i njurarna. Här detekterade vi mRNA-uttrycket av tre former av natriuretiska peptider (ANP, BNP och CNP). Som förväntat förbättrades de tre formerna av natriuretiska peptider markant i de hindrade njurarna (Fig. 7A – C). Rotenonbehandling resulterade i betydande blockad av BNP och en trend med CNP-dämpning men visade ingen effekt på ANP (Fig. 7A – C). Dessa data indikerade att undertryckning av BNP och / eller CNP kan vara fördelaktigt för att förhindra nedreglering av NKCC2 och ENaC vid obstruktiv njursjukdom.

( A ) qRT-PCR-analys av ANP. ( B ) qRT-PCR-analys av BNP. ( C ) qRT-PCR-analys av CNP. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Effekter av mitokondriell komplex-I-hämning på kväveoxidsyntaser i hindrade njurar

För att ytterligare studera de potentiella mekanismerna som är involverade i effekterna av rotenon på reglering av NKCC2 och ENaC undersökte vi kväveoxidsyntaser inklusive iNOS, eNOS och nNOS via qRT-PCR. Som visas av data, var iNOS och eNOS, men inte nNOS, förhöjda i de hindrade njurarna (Fig. 8A – C). Efter rotenonbehandling normaliserades iNOS, men inte eNOS, (Fig. 8A), vilket antyder en potential för iNOS-härledd kväveoxid att bidra till effekten av rotenon på modulering av natriumtransportörer i hindrade njurar.

( A ) qRT-PCR-analys av iNOS. ( B ) qRT-PCR-analys av eNOS. ( C ) qRT-PCR-analys av nNOS. De presenterade uppgifterna är medel ± SE. N = 5 i varje grupp.

Bild i full storlek

Diskussion

Obstruktiv njursjukdom är en mycket vanlig klinisk komplikation. Njurobstruktion leder till en snabb nedreglering av natriumtransportörer inom 24 till 72 timmar och tidsberoende utveckling av tubulointerstitiell fibros 8, 14, 15 . Frigörandet av njurhindring åtföljs av betydande polyuria och saltavfall 14, 15, vilket kan resultera i vätskeobalans och elektrolytstörningar. Under de senaste decennierna har ett antal undersökningar relaterade till de patogena mekanismerna som ligger till grund för den hindringsinducerade nedregleringen av natriumtransportörer i njurarna. Nørregaard R et al. visade att COX-2 / prostaglandin E2-signalering kan vara en mekanism för att inducera dysregulering av njuratriumtransportörer 9 . Senare rapporterade denna grupp vidare att Ang II också är involverad i en patogen mekanism i detta fenomen 8 . Dessa distinkta fynd indikerade komplexiteten hos mekanismerna förknippade med denna patologiska process och utlöste vårt intresse för att ytterligare studera detta fenomen.

Mitokondriell skada har observerats i obstruktiva njurar 11, 12, 13 . Mitokondriell skada orsakar ATP-utarmning, reaktiv syrespecies (ROS) överproduktion och frisättning av proapoptotiska faktorer såsom cytokrom C och mitokondriell DNA, som är involverad i vävnadsskada. Nyligen fann vi att hämning av mitokondriell komplex-I försvagade njurfibros i hindrade njurar 13, i överensstämmelse med den observerade förbättrade mitokondriell dysfunktion och ROS-produktion 13 . I den aktuella studien undersökte vi vidare rollen för mitokondrierna i att reglera renala natriumtransportörer i obstruktiv nefropati via administration av rotenon, en etablerad hämmare av mitokondrialt komplex-1. Som väntat mRNA-nivåer för de flesta natriumtransportörer, inklusive NHE3, NCC, NKCC2, a-Na-K-ATPase och ENaCa, markant nedreglerades, såsom bestämdes via qRT-PCR. MRNA-uttrycket av ENaCp och ENaCγ påverkades inte av njurhinder. Efter administrering av rotenon dämpades minskningen av mRNA-nivåerna av NKCC2 och ENaCa, men inte de andra natriumtransportörerna. Genom Western blotting fann vi att nedregleringen av NKCC2, p-NKCC2 och ENaCα var helt omvänd av rotenon. Proteinnivåerna för andra transportörer, inklusive NHE3, NCC, a-Na-K-ATPase, ENaCp och ENaCy, ändrades emellertid inte av rotenon. Nyligen genomförda studier från våra och andra grupper visade att rotenonbehandling dämpade oxidativ respons i obstruktiva njurar 13, 16 . För att definiera rollen för mitokondriell oxidativ stress vid reglering av natriumtransportörer vid obstruktiv njursjukdom behöver framtida experimentella bevis. Dessutom är mekanismen för rotenoneffekt på ENaCα-reglering, men inte andra ENaC-subenheter i denna experimentella inställning oklar. Emellertid rapporterades också den distinkta regleringen av ENaC-subenheter i andra experimentella inställningar tidigare 17, 18 . Dessa resultat indikerade en selektiv roll av rotenon vid reglering av natriumtransportörer i njurarna i samband med kronisk njurobstruktion.

Vi undersökte vidare njurinnehållet i PGE2 och Ang II och fann att båda var markant förhöjda genom njurhinder. Ingen av dem påverkades dock av rotenon. Under tiden hämmas inte uppregleringen av angiotensinogen mRNA-uttryck av rotenon. Dessa data antydde att effekterna rotenon på att skydda NKCC2 och ENaCa nedreglering är oberoende av PGE2 och Ang II. På grund av den kända rollen för ET1 i att modulera renala natriumtransportörer 19, 20, 21 upptäckte vi mRNA-nivåerna för ET1 i njurarna. I likhet med PGE2 och Ang II var uppregleringen av renal ET1 oförändrad hos djur som utsattes för rotenonbehandling, vilket antydde att ET1 kanske inte spelar en roll i att förmedla effekterna av rotenon under denna process.

Natriuretiska peptider, inklusive förmaks-natriuretisk peptid (ANP), hjärn-natriuretisk peptid (BNP) och natriuretisk peptid av C-typ (CNP), uttrycks i njurarna och spelar viktiga roller för att reglera renala natriumtransportörer 22, 23, 24, 25, 26 Därför undersökte vi regleringen av dessa natriuretiska peptider via qRT-PCR. Påfallande uppreglerades alla peptiderna i hindrade njurar, och rotenonbehandlingen minskade signifikant BNP-nivån och resulterade i en trend med CNP-undertryckning. Förstärkningen av ANP var oförändrad hos rotenonbehandlade djur. Dessa data antydde att BNP kan hänföras till effekterna av rotenon på reglering av NKCC2 och ENaCa i hindrade njurar. För närvarande finns det inga direkta bevis som indikerar förhållandet mellan mitokondriell funktion och natriuretiska peptider. Emellertid har inflammation rapporterats vara associerad med förbättring av plasma BNP och CNP 27, 28 . Med tanke på den antiinflammatoriska effekten av rotenon vid obstruktiv nefropati 13, kan vi anta att rotenon kan dämpa ökningarna av BNP och CNP via en antiinflammatorisk mekanism. Dessutom krävs fortfarande en studie för att utvärdera natriuretiska peptiders roll i denna patologiska process via hämning av aktiviteten hos BNP och / eller CNP.

En annan känd regulator för njuratriumtransportörer är kväveoxid (NO) 29, 30, 31 . NO genereras av tre kväveoxidsyntaser (iNOS, eNOS och nNOS). Genom qRT-PCR-analys observerade vi robust uppreglering av iNOS och eNOS, men inte nNOS, i hindrade njurar. Det är viktigt att rotenon selektivt och fullständigt normaliserad iNOS-induktion. Dessa intressanta fynd antydde att hämning av iNOS-härledd NO av rotenon kan bidra till effekterna av rotenon i denna experimentella inställning till viss del. Både inflammation och oxidativ stress bidrar till iNOS-induktion 32, 33, varför rotenon avskaffad iNOS-induktion kan genom sina aktiviteter av antiinflammation och anti-oxidativ stress 13, 16 .

Sammanfattningsvis, med användning av mitokondrialt komplex-1-hämmare rotenon, observerade vi ett intressant fenomen, där hämning av mitokondrialt komplex-1 selektivt reverserade den hindringsinducerade nedregleringen av NKCC2 och ENaCa i njurarna. De distinkta responserna från natriumtransportörer på rotenonbehandling indikerade att nedregleringen av NKCC2 och ENaC kan vara förknippad med en annan patogen mekanism än observerats för andra natriumtransportörer i obstruktiv nefropati. Mitokondriernas roll kan vara särskilt viktig för reduktion av NKCC2 och ENaCα, men inte den andra transportören. Dessa fynd kastar inte bara nytt ljus på vår förståelse av de mekanismer som ligger till grund för den hindringsrelaterade dysreguleringen av njuraratriumtransportörer, utan föreslår också nya mål för att hantera njurfokuseringsdefekter i obstruktiv nefropati.

metoder

djur

C57BL / 6J-möss köptes ursprungligen från Jackson-laboratoriet. Denna muskoloni förökades vid Nanjing Medical University. I alla experiment användes 3- till 4-m-gamla hanmöss. Alla möss hölls under en 12: 12-timmars ljus-mörk cykel (ljus tändes vid 06:00 och tändes vid 18:00). Djurstudier utfördes under protokoll i enlighet med relevanta riktlinjer och förordningar och godkändes av Nanjing Medical University Institutional Animal Care and Use Committee.

Upprättande av UUO-musmodellen

Unilateral ureterhindring inducerades såsom tidigare beskrivits 13, 34 . Kortfattat exponerades den vänstra urinledaren och ligerades därefter med 6, 0 ​​silke genom ett litet abdominal snitt under anestesi med 2, 0% isofluran. Buken stängdes i två lager. Alla mössen fick analgesi (subkutan injektion av 50 μg / kg buprenorfin (Temgesic, Shering-Plough) efter operationen. Efter operationen gavs en gelédiet med eller utan rotenon i en dos av 500 ppm till UUO-mössen). Skamkontrollmössen behandlades med gelédieten utan rotenon. Efter sju dagar med UUO och rotenonbehandling avlivades mössen (N = 5 per grupp) och deras njurvävnad skördades för analys av gen- och proteinuttryck och histologisk förändringar.

immunohistokemi

Njurarna fixerades med 10% formalin och inbäddades i paraffin. Nyresektioner (4 mikrometer tjocklek) inkuberades i 3% H202 under 15 minuter vid rumstemperatur för att blockera endogen peroxidasaktivitet. Efter kokning i antigenåtervinningslösning (1 mmol / L Tris-HCl, 0, 1 mmol / L EDTA, pH = 8, 0) i 15 minuter vid hög effekt i en mikrovågsugn, inkuberades sektionerna över natten vid 4 ° C med en kanin-anti- NKCC2-antikropp (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada) eller en kanin-anti-ENaCα-antikropp (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada). Efter tvättning med PBS applicerades den sekundära antikroppen och signalen visualiserades med användning av ett ABC-kit (Santa Cruz Biotechnology).

immunoblotting

Hela njuren lyserades och proteinkoncentrationen bestämdes med användning av Coomassie-reagenset. Protein (60 ug) från hela njurlysat denaturerades i kokande vatten under 10 minuter, separerades via SDS-polyakrylamidgelelektrofores och överfördes till nitrocellulosamembran. Fläckarna blockerades över natten med 5% icke-fet torrmjölk i Tris-buffrad saltlösning (TBS), följt av inkubering under 1 timme med kanin anti-NHE3 (Abcam, Cambridge, MA), anti-a-Na-K-ATPase (Abcam ), anti-NKCC2 (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada), anti-ENaCα (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada), anti-ENaCβ (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada) eller anti-ENaCy (Stressmarq Biosciences Inc., Kanada) på en utspädning av 1: 1 000 Efter tvättning med TBS inkuberades blottarna med en get-pepparrotsperoxidas-konjugerad sekundär antikropp (1: 1 000 utspädning) och visualiserades med användning av ECL-satser (Amersham, Piscataway, NJ USA).

QRT-PCR

Total RNA-isolering och omvänd transkription utfördes såsom tidigare beskrivits 35 . mRNA bestämdes via qRT-PCR. Oligonukleotider designades med användning av Primer3-mjukvara (tillgänglig på //frodo.wi.mit.edu/primer3/), och sekvenserna visas i tabell 1. qRT-PCR-amplifiering utfördes med SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Warrington, UK ) och Prism 7500 Real-Time PCR Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Cykelförhållandena var 95 ° C under 10 minuter, följt av 40 cykler av 95 ° C under 15 sekunder och 60 ° C under 1 min.

Full storlek bord

Enzym Immunoassay (EIA)

Njurvävnad homogeniserades i fosfatbuffrad saltlösning, följt av centrifugering under 5 minuter vid 10 000 rpm. Supernatanten utspäddes 1:50 med enzymimmunoanalysbuffert. Koncentrationen av PGE2 bestämdes med användning av en enzymimmunanalys enligt tillverkarens instruktioner (Cayman, Ann Arbor, MI). Njurinnehållet i An II mättes med EIA-satser (Cayman, Ann Arbor, MI).

Statistisk analys

Alla värden presenteras som medelvärde ± SE. Statistisk analys utfördes med användning av ANOVA följt av multipeljämförelsetest. Skillnader ansågs vara signifikanta när P <0, 05.

ytterligare information

Hur man citerar den här artikeln : Zhang, Y. et al. Hämning av mitokondrialkomplex-1 förhindrar nedreglering av NKCC2 och ENaCa vid obstruktiv njursjukdom. Sci. Rep. 5, 12480; doi: 10.1038 / srep12480 (2015).

kommentarer

Genom att skicka en kommentar samtycker du till att följa våra villkor och gemenskapsriktlinjer. Om du finner något missbruk eller som inte överensstämmer med våra villkor eller riktlinjer ska du markera det som olämpligt.