Utvärdering av vävnad pca3 uttryck i prostatacancer genom rna in situ hybridisering - en korrelativ studie med urin pca3 och tmprss2-erg | modern patologi

Utvärdering av vävnad pca3 uttryck i prostatacancer genom rna in situ hybridisering - en korrelativ studie med urin pca3 och tmprss2-erg | modern patologi

Anonim

ämnen

  • Genuttrycksanalys
  • Icke-kodande RNA
  • Prostatacancer

Abstrakt

PCA3 är ett prostataspecifikt icke-kodande RNA, med användbarhet som en urinbaserad biomarkör för tidig upptäckt. Här rapporterar vi utvärderingen av vävnads- PCA3- uttryck med RNA in situ- hybridisering i en kohort av 41 kartlagda prostatektomiprov. Vi jämförde vävnads- PCA3- uttryck med vävnadsnivå-ERG-uttryck och matchade pre-prostatektomi-urin- PCA3- och TMPRSS2-ERG- nivåer. Över 136 objekt som innehöll 138 foci av prostatacancer, uttrycktes PCA3 i 55% av cancerfoci och 71% av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasia foci. Sammantaget var specificiteten hos vävnads- PCA3 > 90% för prostatacancer och högkvalitativ prostatisk intraepitel neoplasi tillsammans. Vävnads-PCA3- canceruttryck var inte signifikant associerat med PCA3- uttryck urin. PCA3- och ERG-positivitet i cancerfoci var positivt associerade ( P < 0, 01). Vi rapporterar den första omfattande bedömningen av PCA3- uttryck i prostatektomiprov och finner begränsad korrelation mellan vävnads- PCA3 och matchad urin i prostatacancer.

Huvudsaklig

PCA3 är ett icke-kodande RNA specifikt överuttryckt i> 90% av prostatacancer. 1, 2 Urinanalysen för PCA3 (PROGENSA, Gen-Probe, San Diego, CA, USA) har nyligen godkänts av Food and Drug Administration för att förutsäga prostatacancer vid rebiopsy. Eftersom PCA3 är ett icke-kodande RNA, är immunohistokemisk-baserad detektion inte genomförbar. Endast en enda studie som utvärderar vävnads- PCA3- RNA-uttryck genom hybridisering in situ har rapporterats, vilket visade PCA3- uttryck i majoriteten av prostatacancerfoci och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasia-foci, samt en betydande delmängd (∼ 30%) av godartade körtlar. 3

2005 upptäckte vår grupp kromosomala omarrangemang i prostatacancer vilket resulterade i fusion av den 5 ′ otranslaterade regionen av den androgenreglerade genen TMPRSS2 med medlemmar i den E26-transformationsspecifika familjen av transkriptionsfaktorer. 4, 5 Fusioner som involverar ERG representerar 90% av alla E26-transformationsspecifika fusioner, och fluorescens in situ- hybridisering för detektion av ERG- omarrangemang har visats vara mycket specifik för prostatacancer och högkvalitativ prostatisk intraepitel neoplasi intill prostatacancer. 6, 7, 8, 9 Monoklonala antikroppar mot ERG har använts som surrogat för ERG- omarrangemangsstatus och har visat diagnostiskt användbarhet med hög känslighet och specificitet för prostatacancer med TMPRSS2-ERG- omarrangemang. 10, 11

Vår grupp utvärderade nyligen en transkription-medierad amplifieringsanalys av klinisk kvalitet som kvantifierar TMPRSS2-ERG mRNA i urin efter post-digital rektal undersökning. Vi har visat att urin TMPRSS22-ERG i kombination med urin PCA3 ökar användbarheten av serum PSA för att förutsäga förekomsten av prostatacancer och signifikant prostatacancer (enligt Epstein-kriterier) vid rebiopsy och korrelerar med den totala linjära dimensionen av ERG- positiva prostatacancerfoci på prostatektomiprov. 12

Till skillnad från ERG är vävnadsnivåuttryck av PCA3 och dess korrelation med urinuttryck inte väl förstått. För att utvärdera vävnadsnivåuttrycksmönstret för PCA3 använde vi därför en ny RNA in situ- hybridiseringsanalys för detektion av PCA3 och utvärderade dess expression i prostatacancer och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi. Vi jämförde också vävnads- PCA3- uttryck med vävnads-ERG-uttryck genom immunohistokemi och urinuttryck av PCA3 och TMPRSS2-ERG.

Resultat

Prostatektomi kohort

Som tidigare rapporterats hade de 41 prostatektomiproverna i denna studie en median av 3 cancerfoci (intervall 1–11) och en median total linjär dimension på 2, 5 cm (intervall 0, 4–5, 5 cm). 12 De flesta fall var begränsade till prostata (pT2, 37/41, 90%) och hade en indextumör Gleason-poäng på 7 (31/41, 76%).

PCA3 Expression av ISH och korrelation med ERG Expression av IHC

Totalt 138 tumörfoci utvärderades med PCA3 RNA in situ hybridisering. Av de 159 tumörfocier som identifierats i vår tidigare studie förlorades 12 21 små tumörfoci vid djupare snittning. Av de 138 utvärderade tumörfocierna var 77 (56%) PCA3- positiva. PCA3- intensiteter för alla tumörfoci var 4 (43 foci, 31%), 3 (29 foci, 21%), 2 (5 foci, 4%), 1 (20 foci, 14%) och 0 (41 foci, 30 %). Indextumören var PCA3- positiv i 25 fall (61%). PCA3- intensiteter för indextumörknölar var 4 (16 tumörknuter, 39%), 3 (9 noduler, 22%), 2 (1 nodul, 2%), 1 (6 noduler, 15%) och 0 (9 noduler, 22%). Av alla PCA3- positiva cancerfoci visade 29 (37%) fokal PCA3- färgning. PCA3- uttryck noterades i minst ett tumörfokus i 36 fall (88%). PCA3- status för indextumörfoci associerades inte med Gleason-poängen ( P = 0, 34, Spearman-korrelation). De patologiska data, PCA3- status och PCA3- poäng för urin sammanfattas i tabell 1. Mikrofotografier som visar diffus och fokal PCA3- expression finns i figur 2.

Full storlek bord

Image

PCA3 (RNA in situ- hydridisering) -uttryck med motsvarande H & E-färgade sektioner. Diffus expression med maximal intensitetspoäng 4 ( a, H&E; b, PCA3 RNA in situ hybridisering; båda vid × 200 förstoring). Fokaluttryck med intensitetspoäng 4 på höger sida av bilden och 0 vid vänster sida av bilden ( c, H&E; d, PCA3 RNA in situ- hybridisering; båda vid × 200 förstoring).

Bild i full storlek

Medianens totala PCA3- positiva linjära tumördimension hos de 41 patienterna var 1, 6 cm (intervall 0–5, 1 cm). Medianantalet PCA3- positiva tumörfoci per fall var 2 (intervall 0–7). Medianens totala PCA3- intensitet i alla 41 fall var 7 (intervall 0–26). Median PCA3- produktpoäng var 6 (intervall 0–20). PCA3- positiva tumörfoci var totalt sett större än PCA3- negativa tumörfoci (median 0, 9 respektive 0, 6 cm, respektive två-tailed t- test, P < 0, 01).

ERG-uttryck identifierades i 70 tumörfoci (50%) och 53 tumörfoci (38%) var positiva för både ERG och PCA3 . Sammantaget var 94 foci (68%) över alla tumörfoci positiva för ERG, PCA3 eller båda (figur 3). Det fanns en signifikant positiv samband mellan PCA3- status med RNA in situ- hybridisering och ERG-status genom immunohistokemi i tumörfoci ( P < 0, 01, Fishers exakta test). Median PCA3- intensitet var 3+ i ERG-positiva noduler och 1+ i ERG-negativa noduler. Av de 41 fallen hade 95% (39/41) minst ett tumörfokus positivt för antingen PCA3 genom RNA in situ- hybridisering eller ERG-uttryck genom immunohistokemi.

Image

PCA3 RNA-hybridisering in situ och ERG-immunohistokemi status för alla tumörfoci.

Bild i full storlek

PCA3- uttryck i högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi

Vi identifierade 66 foci av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi intill cancer, varav 51 (77%) var PCA3- positiva. Vävnads-PCA3- intensiteter för intilliggande högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi var 4 (29, 44%), 3 (19, 29%), 2 (3, 5%), 1 (4, 6%) och 0 (11, 17 %). Högklassig prostatisk intraepitelial neoplasi intill PCA3- positiv cancer tenderade att vara PCA3- positiv (90%, 38/42 foci). Däremot delades högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi intill PCA3- negativ cancer nästan lika i PCA3- positiva (54%; 13/24 tumörfoci) och PCA3- negativa (46%; 11/24 tumörfoci) (figur 4 och 5 ).

Image

PCA3- RNA- in- hybridisering i prostatacancer och angränsande högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi som uppvisar konkordant positiv ( a, H&E; b, PCA3 RNA- in- hybridisering; både vid × 200 förstoring) och negativ ( c, H&E; d, PCA3 RNA i situ- hybridisering; båda vid × 200 förstoring) PCA3- status.

Bild i full storlek

Image

PCA3 RNA-hybridiseringsstatus in situ för prostatacancer och intilliggande högkvalitativ intraepitelial neoplasi.

Bild i full storlek

Vi hittade 16 foci isolerad högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi efter noggrann granskning av 15 slumpvis utvalda fall. Av dessa var 56% (9/16) PCA3- positiva av RNA-ISH. PCA3- poäng för isolerad högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi var följande: 4 (4, 25%), 3 (3, 19%), 2 (2, 13%), 1 (3, 19%) och 0 (4) 25%). Totalt var 71% (60/84) av alla identifierade högkvalitativa intraepitelial neoplasia-foci PCA3- positiva.

Alla godartade körtlar undersöktes med avseende på PCA3- uttryck. Av de godartade körtlarna var 50–60 acini (på 10 bilder från 9 fall; intensitetsintervall 2–3) PCA3- positiva. Dessa körtlar sågs ofta nära (<3 mm från) PCA3 -positiva tumörfoci och de återstående godartade prostatakörtlarna, inklusive alla foci för atrofi och adenos, var PCA3- negativa. I 136 vävnadssektioner visade således positivt PCA3- uttryck genom RNA in situ- hybridisering en specificitet av> 90% för kombinerad prostatacancer och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi.

Urin PCA3 och Urine TMPRSS2-ERG

Alla 41 patienter hade tillräckligt med urin-RNA för utvärdering av PCA3 och TMPRSS2-ERG . Median urin PCA3- poäng var 40 (sd 38, intervall 3–186). Av dessa hade 24 (59%) PCA3- poäng i urin> 35, ett föreslaget optimalt avbrott för upptäckt av cancer vid biopsi, 18 och 29 (71%) hade PCA3- poäng urin> 25, den nuvarande Food and Drug Administration godkände avbrott för att förutsäga prostatacancer efter en negativ biopsi. Urin PCA3- poäng korrelerade väl med antalet tumörfoci ( r s = 0, 51, P < 0, 01) och korrelerade svagt med summerad total linjär tumördimension ( r s = 0, 29, P = 0, 06), i överensstämmelse med vår tidigare studie med denna kohort. 12 Urin PCA3 korrelerade inte signifikant med Gleason-poängen för indextumörknöl ( P = 0, 89, Spearman-korrelation).

Urin PCA3- poäng korrelerade inte bra med något oberoende mått på PCA3- positiv tumörvolym , inklusive indexknut PCA3- poäng ( r s = −0, 1, P = 0, 52), total PCA3- positiv linjär tumördimension ( r s = 0, 09, P = 0, 56) eller PCA3- produktpoäng ( r s = 0, 04, P = 0, 78). Även om urin- PCA3 korrelerade med antalet PCA3- positiva tumörfoci per fall ( rs = 0, 34, P = 0, 03), blev denna korrelation icke-signifikant på multivariat linjär regression inklusive totalt antal tumörfoci (utfall variabel urin PCA3- poäng; totalt antal tumörfoci P < 0, 01, totalt antal PCA3- positiva tumörfoci P = 0, 88). På samma sätt, även om total PCA3- intensitet visade korrelation med PCA3- urin som närmade sig statistisk signifikans ( r s = 0, 29, P = 0, 06), var detta också statistiskt icke-signifikant vid multivariat analys (utfall variabel PCA3- urin i urin ; totalt antal tumörfoci P < 0, 01, total PCA3- intensitet P = 0, 38). Användning av både 35 och 25 som avgränsningsvärden för PCA3 urin, PCA3- höga och PCA3- låga grupper urin visade ingen statistisk signifikant skillnad i linjär dimension av PCA3- positiv tumör ( P = 0, 09 för cutoff 35, P = 0, 46 för cutoff 25; två- tailed t- test) eller PCA3- produktpoäng ( P = 0, 21 för cutoff 35, P = 0, 99 för cutoff 25; Wilcoxon rank-sum test) (tabell 2).

Full storlek bord

I vår kohort hade fem patienter (12%) inget PCA3- positivt tumörfokus av RNA in situ hybridisering (totalt nio tumörfoci). Median urin PCA3- poäng hos dessa patienter var 34, 8 (intervall 3, 2–82, 9). På samma sätt visade två patienter (5%) inget PCA3- positivt fokus av RNA in situ- hybridisering eller ERG-positivt fokus genom immunohistokemi. Urin PCA3- poäng hos dessa patienter var 34, 8 och 49, 7.

Av de 41 patienterna hade 12 (29%) PCA3 <25 urin. Av dessa hade 92% (11/12) minst ett PCA3- positivt tumörfokus. Medianantalet av PCA3- positiva tumörfoci var 1 (intervall 0–4). Median PCA3- positiv linjär tumördimension var 1, 3 cm (intervall 0–3, 5). PCA3- intensiteterna för indextumörknölar hos dessa patienter var följande: 4 (6 knölar, 50%), 3 (1 nodul, 8%), 1 (3 knölar, 25%) och 0 (2 knölar, 17%). Av de sju indexknutorna med PCA3- intensitet 3 eller 4 visade tre av dem diffust uttryck inom tumörfokus. Median urin PCA3- poäng hos dessa sju patienter med indexknop som visade PCA3- intensitet 3 eller 4 var 10, 5 (intervall 2, 3–19, 1). Fem patienter med PCA3- värden i urin <25 hade en total PCA3- positiv linjär dimension> 1, 6 cm (medianvärdet).

Urin TMPRSS2-ERG- poäng korrelerade med antalet PCA3- positiva tumörfoci ( r s = 0, 34, P = 0, 03). Emellertid korrelerade antalet ERG-positiva tumörfoci mycket starkare med urin TMPRSS2: ERG- poäng ( rs = 0, 64, P < 0, 01), såsom visas i vår tidigare studie, 12 och antalet ERG-positiva tumörfoci korrelerade starkt med antalet av PCA3- positiva tumörfoci ( rs = 0, 63, P < 0, 01).

Vävnad PCA3-uttryck genom in situ- hybridisering vs transkriptionsmedierad amplifiering

De fyra tumörfoci som var starkt PCA3- positiva genom RNA in situ- hybridisering (4/4 intensitet) hade en medianvävnad PCA3- poäng på 10 (intervall 10–19) genom transkriptionsmedierad amplifiering utförd på vävnad. Omvänt visade de fem tumörerna som var PCA3- negativa med RNA in situ- hybridisering (0/4 intensitet) ett medianvävnad PCA3- poäng på 3 (intervall 2-4) genom transkriptionsmedierad amplifiering. Dessa skillnader i PCA3- poäng var statistiskt signifikanta (Wilcoxon rank-sumtest, P = 0, 02). Se tabell 3 för detaljer.

Full storlek bord

Diskussion

PCA3 , ett icke-kodande RNA, rapporterades ursprungligen som specifikt överuttryckt i prostatacancer av Bussemaker et al. 1 I den aktuella studien, med användning av en ny RNA in situ- hybridiseringsteknik för att utvärdera PCA3- uttryck i prostatacancer, har vi visat att PCA3 RNA är signifikant förhöjd i prostatacancervävnad relativt godartad prostatavävnad. Detta är första gången PCA3 har visat sig visa en stark specificitet (> 90%) för cancer och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi i formalin-fixerade paraffin-inbäddade radikala prostatektomiprov. I denna studie kartlade vi systematiskt alla tumörfoci och fann 88% av alla fall i vår kohort visade minst ett PCA3- positivt tumörfokus. Resultaten från den aktuella studien överensstämmer med tidigare vävnadsstudier med PCR-metoder, som visade att även om godartad prostatavävnad visar PCA3- uttryck på låg nivå, är uttrycket i prostatacancervävnad avsevärt högre jämfört med godartad vävnad. 1

På grund av oförmågan att utveckla en immunohistokemi-baserad detektionsplattform för PCA3 har det varit mycket få studier av PCA3- uttryck i vävnad. Så vitt vi vet är en studie av Popa et al 3 den enda andra studien som utvärderar PCA3- uttryck i prostatacancervävnad med hjälp av hybridisering in situ . I en serie av 24 och 26 prostatacancer utvärderade med kromogen respektive radioaktiv in situ- hybridisering, visade deras grupp PCA3- uttryck i majoriteten av prostatacancer (92–96%) och åtminstone fokal cytoplasmisk uttryck i majoriteten av högkvalitativ cancer prostatisk intraepitelial neoplasi (71–96%). PCA3- uttryck noterades också i nästan en tredjedel av godartade körtlar (29–33%), som visade åtminstone fokalfärgning och indikerade dålig specificitet för prostatacancer. Några skillnader mellan vår studie och Popa et al. Nämner. I Popa et al- studien utvärderades procentandelen celler som uttrycker PCA3 och PCA3- uttryck rapporterades som positivt eller negativt. Närvaron av en enda positiv cell definierades som positiv. Däremot använde vi ett kommersiellt tillgängligt välstandardiserat RNA in situ- detektionsförfarande för applicering av ljusa fält. I denna metod är oligonukleotidbaserade RNA-prober utformade för att ge punkterade punkter för varje RNA-transkript för en semikvantitativ utvärdering av vävnadsnivåuttryck av PCA3 RNA. Baserat på detta kunde vi jämföra skillnader i nivån av PCA3- RNA-uttryck bland tumörfoci. Därför är vi de första som introducerar utvecklingen av utvärderingskriterier för PCA3 i formalinfixerad och paraffin-inbäddad vävnad. Föreliggande studie är också avsevärt större och omfattar en välkarakteriserad kohort av 138 tumörfoci i radikala prostatektomiprov, i motsats till de 48 vävnadsblocken (28 prostatacancer och 20 godartade prostatavävnader) som användes i den tidigare studien. I motsats till studien av Popa et al använde den aktuella studien en icke-radioaktiv metod och föreslog därmed en mer kliniskt realistisk analys.

Återkommande TMPRSS2-ERG- fusioner närvarande i ∼ 50% av PSA-detekterade prostatacancer resulterar i överuttryck av ERG-proteinprodukt. 4, 8, 9, 10, 19 Fusionen är pålitligt påvisbar med användning av fluorescens in situ- hybridisering, 6, 8, 9 och immunohistokemi med monoklonala antikroppar riktade mot ERG har visat hög överensstämmelse med fluorescens in situ hybridiseringsresultat. 10, 11, 19, 20, 21 Vi och andra har visat att ERG IHC är> 99% specifikt för prostatacancer och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi, och visar endast sällsynt uttryck i godartade prostatakörtlar. 10, 11 Föreliggande studie visade att 55% av cancerfocierna var PCA3- positiva med RNA in situ- hybridisering, en bråkdel som var något högre än vad som sågs för känsligheten för ERG-immunohistokemi i den nuvarande kohorten (50%) och tidigare studier. 8, 10 På samma sätt, medan 88% av fallen hade minst ett PCA3- positivt cancerfokus, hade något färre (76%) minst ett ERG-positivt cancerfokus. Vi fann en stark, statistiskt signifikant positiv associering ( P < 0, 01) mellan ERG-status genom immunohistokemi och PCA3- status med RNA in situ- hybridisering i prostatacancerfoci. Så vitt vi vet är detta den första rapporten från en sådan positiv förening. En delmängd tumörfoci (44/138 (32%)) var fullständigt negativ för båda markörerna. Trots den starka sambanden mellan PCA3 och ERG-uttryck i tumörfoci visade en delmängd tumörfoci (41, 29%) också omvänd ERG- och PCA3- status. I överensstämmelse med dessa fynd var 68% av tumörfoci positiva för antingen PCA3 eller ERG.

Högklassig prostatisk intraepitelial neoplasi har uppvisat molekylära avvikelser som liknar prostatacancer i många studier, inklusive kromosomala förluster och vinster, 22, 23 telomerförkortning, 24 och AMACR- överuttryck. 25 I överensstämmelse med dessa resultat var 71% av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasia-foci i den här studien PCA3- positiva. Intressant nog, medan majoriteten (90%) av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasia-foci intill PCA3- positiv cancer också var PCA3- positiva, drygt hälften av isolerad högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi (56%) och högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi intill PCA3- negativ cancer (44%) var PCA3- positiva. Förhållandet mellan ERG-status för högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi och tillhörande prostatacancer skiljer sig från den för PCA3 , eftersom det har visats sig vara starkt associerat med ERG-positiv prostatisk intraepitelial neoplasi som är starkt associerad med angränsande ERG-positiv prostatacancer. 13, 17 I motsats till den stora fraktionen av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasia-foci som visar PCA3- uttryck (71%) i den aktuella studien, har flera studier visat att endast en liten fraktion av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi-foci (15) –18%) visar ERG-uttryck. 10, 21 Dessa fynd gynnar hypotesen att ERG-positiv högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi kan indikera osamplad prostatacancer eller högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi som kan utvecklas till invasivt karcinom, vilket inte verkar vara sant för PCA3- positiv hög- kvalitet prostatisk intraepitelial neoplasi. Sammanfattningsvis, medan ERG-positiv högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi representerar minoriteten av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi och kan vara förutsägbar för angränsande ERG-positiv prostatacancer, PCA3- positiva högkvalitativa prostatiska neeplasier tycks representera majoriteten av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi och verkar inte vara förutsägbar för intilliggande prostatacancer.

Den stora majoriteten av kliniska studier av PCA3 har varit på urinmätning, vilket har visat överlägsen känslighet och specificitet för serum PSA för detektering av kliniskt signifikant prostatacancer vid biopsi. 13, 26, 27, 28 På liknande sätt kan TMPRSS2-ERG mRNA detekteras i urinen hos patienter med prostatacancer och korrelerar med linjär omfattning av ERG-positiv cancer genom immunhistokemi. 19, 21 I den aktuella studien korrelerade inte urin PCA3- poäng med något mått på PCA3- positiv tumörbörda genom RNA in situ- hybridisering förutom antalet PCA3- positiva tumörfoci per fall ( r s = 0, 34, P = 0, 03), vilket blev icke-signifikant vid multivariat analys inklusive totalt antal tumörfoci. Däremot har en stark korrelation visats mellan urin TMPRSS2: ERG och både den totala ERG-positiva tumördimensionen ( rs = 0, 68) och antalet ERG-positiva tumörfoci ( rs = 0, 67). 12

Intressant nog hade 12% (5/41) av fallen i den aktuella studien inget PCA3- positivt tumörfokus. Av dessa hade 80% (4/5) PCA3- värden på urin> 25, den nuvarande Food and Drug Administration godkände cutoff-värdet. Det finns flera möjliga förklaringar för denna brist på korrelation mellan PCA3- uttrycksnivåer i urin och vävnad. Först, medan ERG-immunohistokemi visar starkt diffust uttryck inom positiva tumörfoci, tenderade PCA3- RNA in situ- hybridisering att visa fokaluttryck, med variationer i intensitet inom ett givet tumörfokus. I motsats till ERG, där kvantifiering i vävnad är relativt rak, är kvantifiering av PCA3- vävnadsuttryck således mer utmanande. Tillägg till denna svårighet, i motsats till ERG som färgar endotelceller och därigenom erbjuder en positiv intern kontroll, var ingen intern positiv kontroll tillgänglig för PCA3 RNA in situ hybridisering, även om framgångsrika positiva kontroller (utvärdering av närvaron av RNA) kördes parallellt. För det tredje utfördes PCA3- RNA in situ- hybridisering endast på representativa objektglas innehållande majoriteten av indexknuteln. Även om uttryck av PCA3 utvärderades i högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi som råkade vara på cancerinnehållande objektglas, var den här studien inte utformad för att utvärdera PCA3- uttrycket i all högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi i en prostata. Det är möjligt att omätad högkvalitativ prostatisk intraepitel neoplasi börda bidragit till urin PCA3 , särskilt med tanke på att majoriteten av högkvalitativ prostatisk intraepitelial neoplasi är PCA3- positiv. Slutligen förlorades en liten delmängd (13%) av små cancerfoci när man fick djupare sektioner för PCA3- RNA in situ- hybridisering. Dessa förlorade fokuser kan i begränsad grad bidra till bristen på korrelation mellan PCA3- urin och vävnad.

I överensstämmelse med denna brist på korrelation mellan PCA3- värden för urin och vävnad, visade majoriteten av patienterna med PCA3 <25 urin minst ett PCA3- positivt tumörfokus, och hälften visade en indextumörknöl med starkt PCA3- uttryck (4/4 intensitet) med RNA-hybridisering in situ . Otillräcklig RNA-insamling är en osannolik förklaring till dessa avvikande fall, eftersom urin-prostataspecifikt antigen-mRNA mättes i alla fall, och de med otillräckliga värden utesluts från studien. Urin PCA3- poäng kan återspegla samband mellan tumörbörda och total prostatavolym, med större prostata som bidrar med mer PSA-mRNA från godartad prostatavävnad, och därmed sänker PCA3 : PSA-förhållandet. Denna hypotes måste undersökas i framtida studier. Falskt positivt vävnad PCA3 RNA in situ hybridisering är osannolikt, eftersom godartade prostatakörtlar i bakgrunden fungerade som en framgångsrik negativ kontroll. En brist på samband mellan hybridiseringsvärden in situ och medianförstärkningsvärden för transkription verkar också vara osannolika, eftersom våra data visar att värdena mellan dessa olika metodik verkar korrelera. På grundval av de preliminära observationerna från en oberoende och relaterad studie av utvärdering av vävnads- PCA3- uttryck i fall med mycket hög och mycket låg urin- PCA3 , hittade vi andra fall med liknande avvikande resultat (opublicerade data från vår grupp, pågående studie). Det verkar som att processen genom vilken PCA3 RNA kommer in i urinen från prostatacancerceller kan vara mer komplex än vi för närvarande inser. Ytterligare arbete med ett stort antal fall är nödvändigt för att bättre förstå detta förhållande.

Föreliggande studie visade att 88% (36/41) och 76% (31/41) av prostatektomiprov hade åtminstone ett tumörfokus positivt för PCA3 RNA in situ- hybridisering respektive ERG-immunohistokemi. Det är viktigt att 95% (39/41) av fallen hade minst ett tumörfokus positivt för antingen PCA3 eller ERG. Båda patienterna utan PCA3- positiv eller ERG-positiv cancerfokus hade PCA3- poäng urin> 25. Således visade 100% av patienterna i denna studie överuttryck av ERG eller PCA3 i vävnad, urin eller båda.

Den aktuella studien har några begränsningar. Denna kohort återspeglar inte hela spektrumet av patologi vid radikal prostatektomi, inklusive fall med hög Gleason-poäng och högstadium. Därför kanske våra resultat inte nödvändigtvis återspeglar prestanda för PCA3 RNA in situ- hybridisering i högkvalitativa eller sena cancerformer. Vår kohort saknar också uppföljningsinformation som utesluter utvärderingen av föreningar med resultat och är relativt liten. Därför måste våra resultat om uttryck av PCA3 genom RNA in situ- hybridisering i prostatacancer valideras i en större serie.