Emx2 är epigenetiskt tyst och undertrycker tillväxt i lungcancer hos människa | onkogen

Emx2 är epigenetiskt tyst och undertrycker tillväxt i lungcancer hos människa | onkogen

Anonim

ämnen

  • Cell signalering
  • DNA-metylering
  • Lungcancer
  • Tumördämpande proteiner
  • En rättelse till denna artikel publicerades den 4 november 2010

Abstrakt

Lungcancer är en vanlig cancer och den ledande orsaken till cancerrelaterad död över hela världen. Avvikande aktivering av WNT-signalering är inblandat i lungkarcinogenes. EMX2, en mänsklig homolog av Drosophila-tomma spirakelgenen är en homeodomain-innehållande transkriptionsfaktor. EMX2: s funktion har kopplats till WNT-signalvägen under embryonmönster i möss. Det är emellertid lite känt om EMX2: s roll i human tumörgenes. I denna studie fann vi att EMX2 dramatiskt nedreglerades i lungcancervävnadsprover och denna nedreglering var associerad med metylering av EMX2-promotorn. Återställande av EMX2-uttryck i lungcancerceller som saknar endogent EMX2-uttryck undertryckte cellproliferation och invasiva fenotyper, inhiberade kanonisk WNT-signalering och sensibiliserade lungcancerceller för behandlingen av det kemiska cytotoxiska läkemedlet cisplatin. Å andra sidan främjade knockdown av EMX2-uttryck i lungcancerceller som uttrycker endogen EMX2 cellproliferation, invasiva fenotyper och kanonisk WNT-signalering. Sammantaget antyder vår studie att EMX2 kan ha viktiga roller som en ny suppressor vid lungcancer hos människa.

Huvudsaklig

American Cancer Society listar lungcancer som den ledande orsaken till cancerdöd i USA, överträffar alla kombinerade dödsfall från de kommande fyra mest dödliga cancerformen, det vill säga cancer i bröst, kolon, prostata och bukspottkörtel (American Cancer Society, 2008). Mer än 80% av lungcancer är icke-småcellig lungcancer, vilket inkluderar distinkta histologiska subtyper: adenokarcinom, skivepitelcancer och storcellscancer (Travis, 2002). Grundpelarna i konventionella behandlingar har endast erbjudit patienter en begränsad och generellt kortvarig nytta. Sammantaget har 5-årig överlevnad varit på en dyster ∼ 15% i över två decennier (Travis, 2002; Jemal et al., 2008). Den molekylära karcinogenesen av lungcancer kännetecknas av flera förändringar av genuttryck och funktion. Dessa härrör från en serie molekylära och morfologiska händelser som påverkar onkogener såsom K-ras och EGFR (Fong et al., 2003) och tumörsuppressorgener såsom p53 och p16 (Zochbauer-Muller et al., 2000), vilket alla leder obevekligt. till onormala förändringar i cellsignaleringstransduktionsvägar.

Homeobox-genfamiljen kodar transkriptionsfaktorer som reglerar morfogenes och celldifferentiering under embryogenes genom att aktivera eller förtrycka uttrycket av målgener (Boersma et al., 1999). Dessutom har flera homeobox-gener nyligen visats vara associerade med cancer (Raman et al., 2000; Abate-Shen, 2002; Samuel och Naora, 2005; Yoshida et al., 2006). EMX2 är en mänsklig homolog av genen Drosophila tomma spirakler (ems), en homeodomainhaltig transkriptionsfaktor med viktiga funktioner under tidig utveckling. Till exempel uppvisar möss som har homozygot mutation av EMX2 (EMX2 - / -) små hjärnhalvor och luktlökar (Dalton et al., 1989). EMX2 påverkar spridningen av vuxna neurala stamceller genom att reglera frekvensen för symmetriska uppdelningar som genererar två stamceller inom den vuxna neurala stamcellspopulationen, och överuttryck av EMX2 minskar frekvensen för symmetriska uppdelningar (Galli et al., 2002). EMX2 kontrollerar reproduktion av däggdjur genom att justera proliferation av endometricell utan att påverka differentiering (Taylor och Fei, 2005). Dessutom har det rapporterats att förlust av EMX2-funktion leder till ektopisk WNT1-uttryck i telepepon från däggdjur, vilket resulterar i kortikal dysplasi (Ligon et al., 2003). WNT-vägen är välkänd för att ha viktiga roller i embryogenes, stamcellsförnyelse och onkogenes (Klaus och Birchmeier, 2008), inklusive den vid lungcancer (Mazieres et al., 2004; You et al., 2004; He et al., 2005; Huang et al., 2008; Akiri et al., 2009). Det har bara varit ett begränsat antal nyligen genomförda studier som antyder möjlig inblandning av EMX2 i cancer hos människa. Till exempel kan EMX2 vara anti-proliferativ i endometrium, och dess uttryck minskar i endometriala tumörer (Noonan et al., 2001, 2003). EMX2 visar också metylering men sällan i icke-seminom (Lind et al., 2006). EMX2: s roll i tumörigenes är emellertid fortfarande i stort sett okänd. I denna studie försöker vi undersöka EMX2: s roll i människors lungcancer.

Vi undersökte först mRNA-nivåerna av EMX2 i humana lungcancervävnadsprover och deras matchade intilliggande normala vävnader erhållna från 64 patienter med lungcancer. Som jämförelse konstaterades 71, 8% (46–64) lungcancerprover som hade mindre EMX2-uttryck än deras anpassade intilliggande normala vävnader (figur 1a), och denna nedreglering var statistiskt signifikant (medelvärden för EMX2-uttryck mätt med kvantitativ RT – PCR var 3, 78 och 18, 01 i cancervävnader och deras anpassade intilliggande normala vävnader, respektive; P <0, 001). Minskat / frånvarande EMX2-uttryck associerades konsekvent med hypermetylering av EMX2-promotorn i dessa fall utvärderade med qMSP (figur Ib visade ett exempel på 10 parade vävnadsprover). Vi analyserade också EMX2-uttryck och EMX2-promotorns metyleringsstatus i 12 lungcancercellinjer för att verifiera dessa resultat. Sammantaget befanns 10 av de 12 undersökta linjerna sakna EMX2-uttryck (figur 1c). Med användning av qMSP fann vi att EMX2-promotorn i samma 10 cellinjer också metylerades (figur 1d). Därefter, med ett avmetyleringsreagens, 5-aza-2'-deoxicytidin (DAC), återställde vi EMX2-uttryck i cellinjer med initialt tystnad EMX2 (figur 1e). Dessa data indikerar att epigenetisk modifiering kan vara en av de viktiga mekanismerna för att tystna EMX2-genen i lungcancer. Intressant nog rapporterades nyligen metyleringsdämpning för flera andra familjer i homeobox-genen i cancer. Till exempel identifierades HOXA5 som en direkt transkriptionsaktivator för tumörsuppressor p53 och HOXA5-tystnad genom hypermetylering, vilket följaktligen begränsade p53-uttryck i bröstcancer (Raman et al., 2000). HOXA9-promotorn befanns ofta metyleras i icke-seminomatös TGCT (Lind et al., 2006). Våra data avslöjade också att promotorhypermetylering av EMX2 i några få fall inte korrelerade med minskat EMX2-uttryck, vilket tyder på att alternativa mekanismer kan stå för EMX2-nedreglering. I själva verket visade en rapport att EMX2-transkript minskades i en undergrupp av endometriala cancer som undersöktes med 35% förekomst av LOH för regionen 10q25.3 – q26.1 som inkluderade EMX2-genen. Sekvensanalys avslöjade flera EMX2-varianter, inklusive somatiska mutationer och polymorfismer (Noonan et al., 2001).

EMX2-uttryck nedreglerades genom metylering i lungcancervävnader och cellinjer. Färska prover (lungcancervävnad och dess intilliggande normala vävnad) samlades in från patienter som genomgick kirurgisk resektion med godkännande av kommittén för mänsklig forskning vid University of California, San Francisco (UCSF). Proverna knäpptes snabbt fryst i flytande kväve och förvarades vid -170 ° C före användning. Totalt RNA extraherades med användning av TRIzol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Mänskliga lungcancercellinjer köptes alla från American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) och odlades i RPMI 1640 med 10% fetalt bovint serum, penicillin (100 IE / ml) / streptomycin (100 μg / ml) vid 37 ° C i en fuktad 5% CO2-inkubator. cDNA-syntes och Taqman PCR utfördes såsom tidigare beskrivits (Raz et al., 2008). Hybridiseringsprober och primrar (kompletterande informationstabell S1) köptes från Applied Biosystems (ABI, Foster City, CA, USA). EMX2-expression av prover beräknades med användning av 2 -ddCt- metoden (normalisering till deras hushållningsgen GAPDH och jämfördes sedan med total RNA för vuxen normal lungvävnad (BioChain, Hayward, CA, USA)). Kvantitativ metyleringsspecifik PCR (qMSP) utfördes såsom tidigare beskrivits (Fackler et al., 2004; Grote et al., 2005, 2006). Genomiskt DNA extraherades med Qiagen DNeasy-satser (Qiagen, Valencia, CA, USA) och bisulfitmodifiering av genomiskt DNA utfördes med användning av EZ-DNA-metylering-guldpaket (Zymo Research, Orange, CA, USA). Primers och sonder (kompletterande tabell S1) konstruerades med användning av Primer Express och Methyl Primer Express Software v1.0 (ABI) och köptes från Operon (Huntsville, AL, USA). Relativa EMX2-metyleringsnivåer bestämdes med användning av metoden 2- dCt (normalisering till hushållningsgenen ACTB (Raz et al., 2008)) och beräknades sedan förhållandet (tumör / matchad normal för vävnader; cellinje / en vuxen normal lungvävnad (BioChain) för cellinjer). Både kvantitativ RT – PCR och qMSP gjordes i tre exemplar med ett ABI 7300 realtids PCR-system. ( a ) Kvantitativ RT – PCR för 64 tumörer och deras anpassade intilliggande normala lungvävnader. Y- axeln representerar normaliserat relativt EMX2-mRNA-uttryck (godtycklig enhet). ( b ) Kvantitativ RT – PCR (övre panel) och kvantitativ MSP (nedre panel) av 10 representativa tumörer (svarta staplar) jämfört med deras anpassade intilliggande normala lungvävnader (grå staplar). ( c ) Kvantitativ RT – PCR-analys och ( d ) Kvantitativ MSP-analys i lungcancercellinjer. En vuxen normal lungvävnad användes som kontroll. Resultaten är medel ± sd (felstaplar). ( e ) DAC-behandling av lungcancercellinjer. Behandling av cellinjer med 5 μM DAC (Sigma, St Louis, MO, USA) utfördes som tidigare beskrivits (Mazieres et al., 2004). Totalt RNA isolerades med användning av Qiagen RNeasy-kit 72 timmar efter behandling, och EMX2-uttryck undersöktes med semikvantitativ RT – PCR (primrar (kompletterande tabell S1) köptes från Operon). GAPDH fungerade som kontroll för RNA-kvalitet och belastning.

Bild i full storlek

Därefter undersökte vi EMX2: s roller i tillväxten av lungcancerceller där EMX2 tystades av metylering. En vecka efter transfektion och efterföljande selektion av G418 fann vi att EMX2-restaurering i H1299 ledde till betydande proliferativ undertryckning (MTS: P <0, 001; kolonibildningsanalyser: P <0, 001) utan dramatiska morfologiska förändringar (figurerna 2a – c). Däremot, när endogent EMX2-uttryck i A427 tystades av anti-EMX2 shRNA, stimulerades cellproliferation (MTS: P <0, 001; kolonibildning: P = 0, 04) med dramatiska morfologiska förändringar (celler var större med fler grenar efter EMX2 shRNA-behandling ) (Figurerna 2a – c). Dessa resultat kompletterar och stödjer data som observerats i H1299-celler. Genom att använda H1299 stabilt transfekterat med EMX2 undersökte vi dessutom den kemosynergistiska effekten mellan EMX2 och cisplatin, ett allmänt använt kemoläkemedel i kliniken för att behandla lungcancer (figur 2d). Vi observerade att den undertryckande potentialen för måttliga doser av cisplatin förbättrades signifikant genom att återuttrycka EMX2 i H1299-celler ( P <0, 0001), vilket indikerar en potentiell framtida terapeutisk roll för EMX2 i kombination med nuvarande cytotoxiska medel i lungcancer.

EMX2 undertryckte proliferation av lungcancerceller och sensibiliserade lungcancerceller för cisplatin. H1299-celler transfekterades med pcDNA 3.1 / EMX2 däggdjursexpressionsvektor (subklonades från pCMV6-XL5 / EMX2-vektorn (Origene, Rockville, MD, USA)). A427-celler transfekterades med EMX2-shRNA (5'-TCAAGCCATTTACCAGGCTTCGGAGGAAG-3 'och 5'-CGGTGGAGAATCGCCACCAAGCAGGCGAG-3') och icke-tystande shRNA (allt i pRFP-C-RS-vektor, Origene) Transfektion utfördes med användning av Lipofectamine2000 (Invitrogen). Transfekterade celler ompläterades från plattor med sex brunnar till 10 cm skålar för selektion med G418 (500 ug / ml; Invitrogen). Stabila transfektanter hölls i regelbundet medium med G418 (300 μg / ml) före analyser. ( a ) Morfologi under ljusmikroskop (× 40). ( b ) MTS-analys av H1299-celler stabilt transfekterade med EMX2 (fasta diamanter) och tom pCDNA3.1-vektorkontroll (fasta kvadrater); och A427-celler stabilt transfekterade med EMX2 shRNA (fasta kvadrater) och icke-tystande shRNA-kontroll (fasta diamanter). Kontrollerna sattes till 100%. Proliferationsanalys utfördes genom plätering av de stabilt transfekterade cellerna i plattor med 96 brunnar med en densitet av 500–1000 celler / brunn i 100 ul G418 odlingsmedium. Medium ändrades varje dag. Cellviabilitet utvärderades i tre exemplar av CellTiter 96 AQueous (Promega, Madison, WI, USA). ( c ) Kolonibildningsanalys. Totalt ympades 500 individuella stabilt transfekterade celler i 10 cm skålar och odlades under 10 dagar. Kolonier fixerades sedan med 10% formalin, färgades med 0, 5% kristallviolett och räknades. ( d ) Synergistisk effekt mellan EMX2 och cisplatin i H1299. Diamanter, rutor, trianglar och kors är behandlingar av kontrollvektor ensam, kontrollvektor + cisplatin (0, 3 ng / ml), EMX2 cDNA ensam och EMX2 cDNA + cisplatin (0, 3 ng / ml), respektive. Alla resultat är medel ± sd (felstaplar). Skillnader mellan grupper jämfördes med en tvåsidig studentens t- test. En P- värde av ~ 0, 05 ansågs vara signifikant.

Bild i full storlek

För att ytterligare utvärdera EMX2: s funktion vid lungcancerprogression utförde vi en cellinvasionanalys och fann att den procentuella invasionen av EMX2-stabilt transfekterade H1299-celler minskades signifikant ( P <0, 05) och att den procentuella invasionen av EMX2 shRNA-stabilt transfekterade A427-celler ökades signifikant ( P <0, 05) (figur 3a). Genom att använda en 3D-sfäroidmodell för att efterlikna en in vivo mikromiljö, observerade vi att EMX2-stabilt transfekterad H1299 bildade mindre sfärer ( P <0, 05) och EMX2 shRNA-stabilt transfekterad A427 bildade större sfäroider ( P <0, 05) (figur 3b) . Ännu viktigare är att kontroll (icke-EMX2-uttryckande) H1299-celler bildade 3D-sfärer med flera invasiva cellformade grenliknande strukturer som indikerar trasigt basalmembran. Emellertid bildade EMX2-stabilt transfekterad H1299 en mindre invasiv rundare fenotyp ( P <0, 001) (figur 3c). Däremot bildade A427-celler behandlade med kontroll-shRNA mera runda / mindre invasiva sfäroider än de behandlade med EMX2-shRNA ( P <0, 001) (figur 3d). Tillsammans antyder våra resultat att EMX2 kan ha en roll som en ny undertryckare av malig lungcellsprogression eller metastas. För att testa denna hypotes och undersöka mekanismer involverade i EMX2-funktion i lungcancer undersökte vi den kanoniska WNT-signalvägen som är känd för att vara avvikande aktiverad i lungcancer och är viktig för spridning, överlevnad och metastaser av lungcancerceller (Mazieres et al., 2004; You et al., 2004; He et al., 2005; Huang et al., 2008; Akiri et al., 2009; Nguyen et al., 2009). EMX2 cDNA och anti-EMX2 shRNA transfekterades stabilt in i både H1299-celler som saknade EMX2-uttryck respektive till EMX2-uttryckande A427-celler. Efter att stabila transfektanter upprättats använde vi PCR i realtid för att undersöka EMX2-uttryck. H1703-cellinje som uttrycker endogen EMX2 vid liknande nivåer som hos vuxen normal lungvävnad (figur 1c) användes som en EMX2-expressionsnivåkontroll. Vi bekräftade att EMX2-uttryck i EMX2-stabilt transfekterad H1299 var kompatibelt med det fysiologiska uttrycket i normal lunga och bestämde att EMX2-nivåer i shRNA-stabilt transfekterad A427 signifikant nedreglerades (figur 4a). Intressant sett observerade vi att EMX2-restaurering i H1299-celler ledde till minskad WNT-signalberoende transkriptionsaktivitet (figur 4b). Däremot resulterade shRNA-tystnad av EMX2 i A427-celler i ökad transkriptionsaktivitet av den kanoniska WNT-signalvägen (figur 4c). I dessa stabila linjer bekräftade analys av den kanoniska WNT nedströms effektor cytosolisk p-katenin och dess mål Cyclin D1 sambandet mellan EMX2 och den kanoniska WNT-vägen i lungcancer (figur 4d). Efter behandling av H1299-celler med DAC, ett de-metyleringsmedel, fann vi att både cytosoliskt p-catenin och Cyclin D1 nedreglerades, vilket bekräftar vår hypotes (figur 4e). Efter DAC-behandling i A427-celler observerade vi också viss nedreglering av dessa WNT-nedströmseffektorer (figur 4e). Vår tolkning är att DAC inte är ett specifikt de-metyleringsmedel för en enda gen som EMX2. Således bör uttryck av andra tumörsuppressorer som är kända för att vara metylering tystade i lungcancer såsom WNT-vägsantagonister WIF-1 och SFRP (Mazieres et al., 2004; Fukui et al., 2005) också återaktiveras efter DAC-behandling. Detta skulle bidra till nedreglering av dessa WNT-nedströmseffektorer. Dessutom avslöjade vår mikroarrayanalys att återställande av EMX2-uttryck i lungcancerceller nedreglerade metastasgener såsom S100P och S100A4, medlemmar i EF-hand kalciumbindande proteinfamilj (figur 4f). Dessa proteiner har rapporterats inducera metastaser i gnagare mammärmodellsystem för bröstcancer och är uppenbarligen förknippade med dåligt patientresultat i bröst-, kolon-, lung- och matstrupscancer (Donato, 2001; Heizmann et al., 2002; Zimmer et al., 2003; Marenholz et al., 2004). Det är möjligt att EMX2 reglerar transkription av dessa metastasegener i lungcancer genom direkt eller indirekt nedreglering av kanonisk WNT-signalering. Detta stöds av nyligen bevisade att S100P och S100A4 kan vara direkta nedströmsmål för kanonisk WNT-signalering (Stein et al., 2006; Ganesan et al., 2008). Sammantaget antyder våra resultat att EMX2 kan undertrycka lungcancer, antingen direkt eller indirekt, genom reglering av den kanoniska WNT-signalaktiviteten. Dessutom stödde en preliminär analys av samuttryck av flera WNT-familjegen tillsammans med EMX2 i lungcancercellinjer (kompletterande figur S1) en möjlig koppling mellan reducerat EMX2-uttryck och kanonisk WNT-aktivering i lungcancer. Det är möjligt att EMX2 fungerar som en transkriptionell repressor på ett liknande sätt vid lungcancer som det gör under embryonal utveckling. Andra ko-faktorer kan dock ha viktiga roller i EMX2-relaterad transkriptionsreglering. Identifieringen av direkta mål (er) för EMX2 och dess interagerande proteiner behövs för att ytterligare klargöra EMX2: s funktion och dess samband med kanonisk WNT-signalering i lungcancer.

EMX2 dämpade invasiva fenotyper av lungcancerceller. ( a ) Invasionanalys med transwell-kammare med och utan matrigel (BD BioCoat Matrigel Invasion Chamber, BD Biosciences, Lexington, KY, USA) utfördes i tre exemplar för varje stabilt transfektant enligt tillverkarens protokoll. Celler från fem olika fält i varje infogningsmembran räknades under ett ljusmikroskop (× 40) och procent invasion bestämdes enligt följande:% invasion = (medelantal celler invaderande genom matrigelinsatsmembran / medelantal celler som migrerade genom kontrollinsättningsmembran utan matrigel) × 100. ( b, c ) Analyser av 3D-kulturer av stabilt transfekterade celler. Åtta-kammare odlingsglas (BD) belades med 35 ul tillväxtfaktor reducerad Cultrex källare membran extrakt (Trevigen, Gaithersburg, MD, USA) per brunn och lämnades för att stelna under 15 minuter. H1299- eller A427-celler behandlades med trypsin och återsuspenderades i vanligt odlingsmedium med serum. Cultrex tillsattes till en total koncentration av 2%, och 500 ul av cellsuspensionen tillsattes till varje kammare i den matrigelbelagda sliden. Medium ersattes varannan dag. Efter 1 vecka mättes 100+ acini för storlek och betygsatt för störning. ( b ) Kvantifiering av storleken på sfäroider. ( c ) och ( d ) Fenotyper av sfäroider (H1299 och A427) kategoriserades i tre typer (rund (fast fyllning), asymmetrisk (tät prickad) och avbröts (gles prickade)) och kvantifierades. Representativa fenotyper i varje behandling visades också. Symbol (*) i varje graf representerar statistisk signifikans ( P <0, 05) av dubbelsidig studentens t- test.

Bild i full storlek

EMX2 undertryckte kanonisk WNT-signalering i lungcancerceller. ( a ) Kvantitativ RT – PCR för EMX2-expression i cellinjer stabilt transfekterad med kontroll- eller EMX2-expressionsvektor (i H1299) och med icke-tystnadskontroll eller EMX2-specifikt shRNA (i A427). H1703 fungerade som en EMX2-expressionsnivåkontroll. ( b, c ) TOP / FOP-luciferasanalyser (utfördes 24 timmar efter transfektion som tidigare beskrivits i Clement et al., 2008) i H1299-celler som är stabilt transfekterade med EMX2 cDNA och i A427-celler som är stabilt transfekterade med EMX2 shRNA. ( d ) Western blotting av nyckelkanonisk WNT nedströms effektor (cytosolisk p-catenin; antikropp från BD Biosciences) och målprotein (Cyclin D1; antikropp från Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA). P-Actin (antikropp från Sigma) användes som proteinkontroll. Cytosoliska proteiner framställdes med användning av NE-PER kärnkrafts- och cytoplasmatiska extraktionsreagens (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) enligt tillverkarens protokoll. ( e ) Effekten av DAC på viktiga kanoniska WNT-nedströmseffektorer. Semikantitativ RT – PCR användes för att bekräfta återaktivering av EMX2-uttrycket efter behandling av cellinjer med 10 μM DAC. DAC-behandling och semikvantitativ RT – PCR utfördes såsom beskrivits i figur 1e. GAPDH fungerade som kontroll för RNA-kvalitet och belastning. Western blotting av cytosoliskt P-catenin och Cyclin D1 utfördes såsom beskrivits i figur 4d. P-Actin användes som proteinkontroll. ( f ) Microarray-profilering av lungcancercellinje H1299 stabilt transfekterad med EMX2 och tom vektorkontroll. Partiell värmeskarta med hierarkisk kluster inklusive S100A4 och S100P visas. Total RNA-kvalitet utvärderades med användning av ett Pico Chip på en Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent, Santa Clara, CA, USA). RNA amplifierades och märktes med Cy3-CTP eller Cy5-CTP med användning av de fluorescerande linjära amplifieringssatserna med låg RNA-ingång efter tillverkarens protokoll. Märkt cRNA utvärderades med användning av Nandrop ND-100, och lika stora mängder Cy3- och Cy5-märkt mål hybridiserades till Agilent helmänskligt genom 44 K bläckstrålesystem. Hybridiseringsprover randomiserades i formatet 3 × 44 K för att korrigera eventuella parti-förspänningar. Hybridiseringar utfördes under 14 timmar enligt tillverkarens protokoll. Matriser skannades med hjälp av Agilent-mikroarray-skannern och råa signalintensiteter extraherades med Feature Extraction v9.5-programvaran (Agilent).

Bild i full storlek

Sammanfattningsvis är detta den första demonstrationen av vikten av EMX2 som en suppressor vid lungkarcinogenes. Epigenetisk tystnad av EMX2-uttrycket kan vara viktigt för avvikande aktivering av den kanoniska WNT-signaleringen i lungcancer och följaktligen proliferation och metastas av lungcancerceller.

Kompletterande information

Powerpoint-filer

  1. 1.

    Kompletterande information

    Kompletterande information åtföljer uppsatsen på Oncogene-webbplatsen (//www.nature.com/onc)